miR-146a介导HCV感染者单核细胞Toll样受体4天然免疫应答耐受的作用探讨

To suppress the host immune system is one of the ways for HCV escaping immune surveillance. MiR-146a acts as a critical negatative regulator of TLR4 pathway. Monocytes from chronic HCV-infected patients had impaired response in TLR4 signaling pathway. Our preliminary study indicated that the expression of miR-146a in peripheral monocytes was significantly increased in patients with HCV infection, suggesting that miR-146a may be involved in the dysfunction of TLR4 pathway of monocytes from HCV-infected patients. In this study, we plan to apply viral transfection, RNA interference and some other methods to investigate the effects of HCV on miR-146a expression. In addition, the monocytes with HCV core transfection and those from HCV-infected patients will be used to study the roles of miR-146a on the function of HCV-infected monocytes and TLR4 pathway.Therefore, this project may help to elucidate the function of miR-146a in HCV infection-inducing immune tolerance in TLR4 pathway and to explore the possibility of restoring immune function of monocytes from HCV-infected patients by targeted inhibition of miR-146a，providing basis for developing new immune therapy methods against HCV infection in the future.

丙型肝炎病毒(HCV)对宿主天然免疫系统的破坏是造成HCV逃逸免疫监视的主要原因之一。miR-146a是单核细胞Toll样受体4(TLR4)通路重要的负性调节因子，前期研究发现HCV慢性感染者来源的外周血单核细胞TLR4信号通路反应低下,HCV感染者外周血单核细胞中miR-146a表达显著升高，提示miR-146a可能参与HCV感染所致单核细胞TLR4通路免疫应答耐受。本项目拟用病毒转染、RNA干扰等方法研究HCV病毒蛋白对单核细胞miR-146a表达的影响，并分别运用转染HCV core蛋白的单核细胞系和患者来源的单核细胞两种培养体系，明确miR-146a对HCV感染者单核细胞功能和TLR4信号通路的效应及机制，探讨针对miR-146a靶向调节恢复HCV感染者单核细胞免疫功能的可能性，为进一步探索新的HCV免疫治疗方法提供实验基础。

丙型肝炎病毒（HCV）对宿主天然免疫系统的破坏是造成HCV逃逸免疫监视的主要原因之一，同时病毒对免疫系统的激活产生的炎症反应也是肝脏受损的重要原因。与正常人相比，HCV感染者来源的外周血单核细胞在未被刺激的状况下自分泌更多的炎性细胞因子，具体机制还不清楚。单核细胞表达的miR-146a、miR-155和miR-125b在免疫调节中发挥重要作用。本研究主要通过体外HCV core蛋白刺激单核巨噬细胞系THP-1系统，探讨miR-146a等microRNA在HCV引起的炎症反应中的作用和机制。.研究结果发现慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单核细胞miR-146a表达增高，在经干扰素/利巴韦林抗病毒治疗病毒量转阴的患者中表达下降。HCV core蛋白与THP-1共培养过程中发现炎性因子TNF-alpha、IL-6和抗炎性因子IL-10均升高，除miR-146a升高外，HCV core还可刺激THP-1表达miR-155，同时抑制miR-125b的生成。而抑制miR-146a的表达，对细胞因子的表达影响不大，而抑制miR-155或增加miR-125b的表达可以显著降低细胞因子TNF-alpha，IL-6和IL-10的表达。沉默基因TLR-2及其下游通路关键蛋白MyD88，miR-146a的表达显著下降，而miR-125b的表达升高，提示HCV 病毒蛋白HCV core可与TLR2及下游MyD88信号通路结合或交叉活化，刺激miR-146a的生成而抑制miR-125b的表达。增加miR-125b可降低炎性和抗炎性细胞因子如TNF-alpha，IL-6和IL-10的表达，其中的机制可能是miR-125b抑制了TLR2/Myd88信号通路中Myd88的表达以及NF-kappaB、ERK1/2和p38的磷酸化。以上研究说明miR-125b可能对HCV感染引起的炎症损伤中起保护作用，HCV core通过下调miR-125b在单核巨噬细胞中激起了过多的细胞因子生成。.本研究已经发表了SCI综述一篇，SCI专著论文一篇，另外一篇文章撰写已经完成，投稿中，其摘要被2016年亚太肝病学会年会（APASL）收录，以壁报形式展出。其他结果也在持续整理中，后续将陆续报告进展。