下丘脑神经肽（Orexin）及其受体调控大菱鲆仔鱼内-外源营养转换的机制研究

仔鱼期是鱼类早期发育的高度敏感期，其间的内、外源营养转换会直接影响到育苗的成活率和质量；下丘脑作为鱼类的摄食中枢在营养生理调控中着非常重要的作用，加强鱼类早期发育过程中下丘脑神经-营养调控作用的深入研究，对于满足鱼类早期发育营养需求和提高人工育苗成活率具有重要的理论和实践意义。本项目以我国北方重要经济养殖鱼类-大菱鲆为研究对象，在克隆下丘脑神经肽（Orexin）及其受体基因的基础上，采用原位杂交、免疫组化、半定量PCR和荧光实时定量PCR技术，系统研究仔鱼由内源营养向外源营养转换过程中Orexin及其受体的基因定位和时空表达模式；采用施加重组Orexin和Orexin受体拮抗剂等方法，研究Orexin及其受体在大菱鲆仔鱼生长发育、营养吸收和能量平衡中的作用；进而将基因定位、表达模式与调控作用联系起来，以期初步阐释Orexin及其受体在大菱鲆仔鱼内-外源营养转换中的神经-营养内分泌调控机制。

仔鱼期是鱼类早期发育的高度敏感期，其间的内、外源营养转换会直接影响到育苗的成活率和质量；下丘脑作为鱼类的摄食中枢在营养生理调控中有着非常重要的作用，加强鱼类早期发育过程中下丘脑神经-营养调控作用的深入研究，对于满足鱼类早期发育营养需求和提高人工育苗成活率具有重要的理论和实践意义。本项目以我国北方重要经济养殖鱼类-大菱鲆为研究对象，成功克隆了下丘脑神经肽（Orexin A和Orexin B)基因序列全长，采用半定量PCR 和荧光实时定量PCR 技术，系统研究了大菱鲆幼鱼的Orexin 基因组织表达模式；通过构建外源蛋白表达载体制备了原核重组大菱鲆Orexin并在此基础上制备了Orexin多克隆抗体，为下一步采用免疫组化技术研究Orexin蛋白的时空表达模式奠定了基础；采用添加受体拮抗剂等方法，研究了Orexin 基因在大菱鲆仔鱼内外源营养转换过程中的时序性表达模式，结果初步证实Orexin 及其受体在大菱鲆仔鱼内-外源营养转换特别是在饥饿仔鱼的摄食调节中具有一定的神经-营养内分泌调控功能。