从IL-33/ST2信号传导通路探讨清热祛湿方治疗特应性皮炎的抗炎机制

The incidence of Atopic dermatitis (AD) is high but lacks of effective treatments nowadays. Many studies have shown that there would be Th2 response and increased IgE antibody in the acute phase of AD, while the infiltration of Th1 cells could be found in the chronic AD lesions. IL-33 can induce IgE-mediated Th2 inflammation in the acute phase directly through its specific receptor ST2. The earlier studies have proved that Qingre-Qushi prescription had a significant effect on the treatment of lesions in acute phase of AD. However,most studies on Qingre-Qushi prescription focused on Th1 response in the past. Based on the latest theory of IgE-dependent Th2 inflammatory response mediated by IL-33/ST2 pathway and in the view of the efficacy of Qingre-Qushi prescription mainly manifested in the acute phase of AD, this study aims to evaculate the anti-inflammatory mechanisms of Qingre-Qushi prescription on the treatment of AD by IL-33/ST2 signal transduction pathway. This research involved two common causative agents of AD－ the allergen of house dust mite (HDM) and staphylococcal enterotoxin B（SEB）. By using models of cells in vitro, Blab/c AD mice （Th1/Th2 type）sensitized by epicutaneous antigen exposures and filaggrin-deficient AD mice (Th2 type), so as to observe whether Qingre-Qushi prescription has regulatory function on the expression of the related molecules by antigen-induced IL-33/ST2 signal transduction pathway. This research aims to provide a theoretical basis for the clinical treatment on Chinese medicine of AD.

特应性皮炎（AD）发病率高，目前缺乏有效的治疗手段。诸多研究显示，在AD急性期以Th2反应为主，IgE抗体升高。而在慢性AD皮损处，表现为Th1细胞浸润。IL-33通过其特异性受体ST2，可直接诱导急性期IgE介导的Th2炎症反应。前期研究表明，清热祛湿方治疗AD急性期皮损，疗效明确。但以往对清热祛湿方药的研究大多集中于Th1方面，鉴于清热祛湿方的疗效主要表现在AD急性期，基于IL-33/ST2介导IgE依赖性炎症反应的最新理论，本课题拟从该信号传导通路探讨清热祛湿方治疗AD的抗炎机制。研究采用尘螨抗原和金葡菌毒素这二种AD常见的致病因子，利用体外培养细胞，抗原经皮致敏Blab/c AD（Th1/Th2型）以及filaggrin缺陷AD（Th2型）小鼠模型，观察清热祛湿方对抗原诱导的IL-33/ST2信号传导通路中相关分子的表达是否具有调节作用。为中医药临床治疗AD提供理论依据。

研究目的：特应性皮炎(atopic dermatitis，AD)发病率高，目前治疗方法多种多样，但缺乏安全有效可长期应用的治疗手段。为了开发新的药物治疗，需要探讨新的靶分子，而IL-33作为IL-1超家族的成员，是最近新发现的一种促炎性细胞因子，参与严重过敏性疾病的发病。IL-33与细胞表面受体ST2结合后，可直接诱导急性期IgE介导的Th2型炎症反应，促使Th2型细胞因子如IL-4、IL-13等的分泌，从而调节上皮细胞、成纤维细胞、肥大细胞及巨噬细胞等组织与免疫细胞的功能活性。本研究通过观察清热祛湿方对卵清蛋白抗原诱导的IL-33/ST2信号轴中相关分子表达的影响，探讨清热祛湿方从该信号轴治疗急性期AD的抗炎机制，为中医药临床治疗AD提供新的理论依据。.研究方法：采用HPLC法观察清热祛湿方指纹图谱；采用RT-PCR法和ELISA法分别于体外观察清热祛湿方对HaCaT细胞所产生的IL-33 mRNA与蛋白质的影响。建立小鼠特应性皮炎模型，将AD小鼠分为中药组（低、中、高剂量组）、抗过敏药组、空白对照组。采用RT-PCR法观察皮肤组织中IL-33、ST2、IL-1RAcP mRNA和Th1型细胞因子（TNF-alpha、IFN-gamma）、Th2型细胞因子（IL-4、IL-13）mRNA的表达量。皮肤组织固定，经HE染色、免疫组织化学染色，观察各组的组织病理学改变及皮肤组织中IL-33、ST2蛋白的表达。ELISA法检测各组小鼠血清中OVA特异性IgE、总IgG、IgG1、IgG2a和IgG3蛋白表达情况。.研究结果：（1）清热祛湿方可降低HaCaT细胞分泌IL-33的mRNA和蛋白表达水平；（2）该方对于卵清蛋白（OVA）诱导的特应性皮炎小鼠有确切的临床疗效；（3）可缓解表皮与真皮的增厚现象并减少皮肤组织中IL-33与ST2阳性细胞数；（4）能明显降低实验动物血清中特异性抗体IgE的浓度及总IgG和IgG1的浓度，减少皮肤组织中IL-33及其受体ST2的阳性表达并调控Th1型、Th2型相关细胞因子。.研究结论：（1）清热祛湿方可降低卵清蛋白诱导的Balb/c小鼠血清特异性IgE水平，减轻皮肤皮炎症状态，具有明确的治疗特应性皮炎的药效作用。（2）本研究显示清热祛湿方可通过调控IL-33/ST2信号通路这一药理机制实现对特应性皮炎的治疗作用。