基于炎症消散的参莲提取物抗动脉粥样硬化机理研究

Through previous study, we have clearly proved that Shenlian extract has potent anti-inflammation, lipid-metabolic regulation and plaque inhibition activities in atherosclerosis (As). Based on recent theory that As is a chronic inflammation which is induced by the imbalanced pro- or anti- inflammatory factors, we further postulated that Shenlian extract functions as a regulator by reconstructing the pathological imbalance in As inflammation and the maintaining of immune homeostasis , especially by targeting the inflammatory resolution procedures. Leading by this, we focus on the study of Shenlian extract in the regulation of inflammatory resolution and macrophage cytosis through the detection of activities of pro-inflammatory resolution key enzymes, concentrations of the lipid metabolic products, conditions for macrophage polarization and the secretion of inflammatory cytokines. At the technological level, by the establishment of the ApoE-/- mouse model, the cellular inflammatory damage model, the macrophage polarization model and the effective application of ultrasound imaging system, CLSM, FCM Ch-IP technology, we plan to identify Shenlian extracts as the potential medicine during the regulation of inflammatory resolution and the re-balance of pathological microenvironment during As disease progression. Our study will provide a novel approach, as well as a new target, for As control and treatment clinically.

我们前期从抗炎、脂质代谢、斑块形成等角度，证实了参莲（SL）提取物的抗As作用。根据As是内源性促炎和抗炎失衡引起的慢性炎症的认识，我们推测，SL提取物可能是通过调控炎性脂质介质和巨噬细胞极化的平衡，影响As炎症趋向、As形成进程，重塑机体稳态，达到防治As疾病的作用，其中，促炎症消散是发挥作用的关键环节。本课题以促进炎症消散的胞葬作用为核心，针对As形成过程中促炎介质和促炎症消散介质合成关键酶活性，炎性脂质代谢产物，细胞因子及其受体，炎症信号转导通路，胞葬作用，巨噬细胞极化，As病灶微环境等节点，建立ApoE-/-小鼠As模型、炎症损伤细胞模型、巨噬细胞极化模型，采用超声成像、细胞分子生物学、免疫组化、CLSM、FCM、Ch-IP等方法，从抗炎和促炎症消散角度研究SL提取物对As进程、炎症及炎症微环境的调控、重塑作用及其机理。为As的有效防治提供新途径、新靶点，为As新药研发提供新思路。

本课题组前期实验中从抗炎、脂质代谢、斑块形成等角度，证实了参莲（SL）提取物具有明显的抗AS作用。AS疾病进展的核心在于斑块炎性微环境的病理失衡，这一失衡的本质在于炎症消散进程的失能，特别以巨噬细胞功能极化失衡和其介导的过氧化脂质炎症原在斑块内的流动受阻为典型表现。从提升机体对AS炎症主动消散的角度，重塑炎症反应平衡，对AS治疗具有明确的有效性和创新价值。首先通过小动物活体超声、小动物核磁，并结合HE染色等传统方法，在颈动脉套管结合高脂饲养的AS疾病模型下，全面系统的评价了SL治疗AS的有效性。体内研究结果显示SL可有效减少斑块形成，减少血清中脂质含量，增加颈动脉和主动脉弓血流量，促进斑块稳定性。同时，我们进一步聚焦巨噬细胞，发现SL可有效抑制巨噬细胞促炎介质的释放、促进炎症消散的释放。在药效明确的基础上，以“巨噬细胞”为靶点，我们采用多种致炎因子（LTB4、AA、4-HNE、LPS、ox-LDL）诱导巨噬细胞建立炎症损伤模型。运用RT-PCR、WB、ELISA、FCM等分子生物学手段结合HE，免疫组化等技术，针对“炎症消散”的具体环节，研究SL促进AS炎症消散的作用，并进一步对其潜在机制及信号通路进行系统研究。结果显示，SL可通过调控STAT3/SOCS3/NF-κB信号通路促进巨噬细胞向M2方向极化，重塑巨噬细胞极化平衡；通过促进巨噬细胞表面吞噬受体MerTK来促进巨噬细胞胞葬作用；通过抑制内质网应激和巨噬细胞清道夫受体CD36的形成，抑制泡沫细胞的形成和凋亡，促进巨噬细胞的有效迁出；在巨噬细胞和平滑肌细胞的相互作用中，SL可通过调控TGF-β-Smas2/3信号通路，促进平滑肌细胞表型转换。本研究依据AS进展的炎性学说，创新的从炎症反应平衡的另一端---炎症消散为关注点，以炎症消散核心环节为落脚点，搭建了AS炎症平衡重塑药物研发的体系化技术平台。揭示了SL提取物治疗AS的有效性，从免疫微环境动态平衡重塑的角度，拓展了SL的药理认识，为其未来的科学合理应用提供了有效的研究证据支持，也为其他相关中药的研发提供了经验借鉴和技术支持。