紫玉米花色苷对禽白血病病毒介导鸡细胞核转录因子kB活性的影响

紫玉米花色苷是一类具有抑制癌细胞增殖的生物活性物质，对人白血病肿瘤细胞具有抑制作用，人白血病与禽白血病肿瘤发生机制与信号传导途径相似。本项目依据病毒感染宿主细胞引发肿瘤过程中最主要常见的核转录因子kB信号传导途径的理论为依据，用紫玉米花色苷对禽白血病病毒（ ALV）介导鸡细胞核转录因子kB活性进行研究，通过ALV-J感染紫玉米花色苷培养的CEF细胞后，测定核转录因子kB的DNA结合活性及反式激活活性和细胞浆中IkB抑制蛋白的降解和IkB激酶活性，解释ALV对核转录因子kB活性影响，进而研究紫玉米花色苷对禽白血病病毒介导鸡细胞核转录因子kB活性的影响，揭示紫玉米花色苷对禽白血病影响机制。该项目研究不仅探明紫玉米花色苷抑制肿瘤的机制，而且有助于预防禽白血病，还可以为人类控制和预防癌症提供借鉴。

本课题到目前为止执行三年，基金全部到位，课题圆满完成，取得了预期的结果。研究内容基本按照原来计划内容进行。除了紫玉米花色苷的规模化制备，增加了其他它六种不同材料（紫甘薯、紫甘蓝、心里美萝卜、黑豆皮、黑加仑、笃斯越桔）花色苷的制备及对禽白血病病毒的抑制作用研究，为揭示不同花色苷的抗病毒功能提供了更好的佐证。具体取得结果如下： .1、采用液质联机法分离纯化鉴定了七种紫色作物花色苷组成。其中紫玉米、紫甘蓝、黑豆皮、笃斯越桔主要以矢车菊色素为基本单元的糖苷，紫甘薯主要以芍药色素为基本单元的糖苷，心里美萝卜主要以天竺葵色素为基本单元的糖苷，而黑加仑花色苷提取物中飞燕草色素和矢车菊色素的含量相当。.2、采用制备色谱从紫玉米花色苷中纯化获得4种花色苷单体，分别为矢车菊色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊-3-（6’-丙二酰-葡萄糖苷）、芍药色素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵色素-3-O-葡萄糖苷。.3、揭示了七种紫色作物花色苷对鸡成纤维细胞系的安全质量浓度范围，以下花色苷抑制病毒活性的研究均在安全浓度范围内进行。 .4、以 DF-1为宿主，禽白血病病毒A亚群（ALV-A）为病毒源成功建立了体外侵染ALV-A的细胞模型。.5、采用MTT和显微镜观察法测定花色苷对DF-1细胞的形态学变化和凋亡情况，确定了七种紫色作物花色苷均具有抗ALV-A的活性，其中芍药素花色苷抑制病毒活性功能最强，矢车菊素次之，天竺葵最弱；且丙二酰酰基化结构减弱了其抑制活性。.6、采用蛋白印迹、电泳迁移等方法测定紫玉米花色苷对ALV-A感染细胞后DF-1细胞的NFκB 反式激活因子p50、p65、p52、cRel、RelB的活性，结果表明禽白血病病毒侵染DF-1细胞后，只有反式激活因子p50/p65从胞浆转移到胞核，其它的激活因子未发生明显变化，揭示了ALV-A诱导p50、p65的表达而影响机体活性，形成肿瘤。紫玉米花色苷作用于病毒侵染细胞模型，抑制了激活因子 p50/p65的表达及从胞浆转移到胞核，从而揭示紫玉米花色苷在禽白血病病毒侵染DF-1细胞中NF-κB信号传导途径抑制肿瘤形成的作用和机制，即通过抑制ALV-A感染细胞后的NFκB p50/p65活性表达及向核内转移而达到抑制病毒的能力，且抑制程度呈剂量关系，为禽白血病控制和预防提供借鉴。