用于动物活体血药浓度检测的SPME在体取样技术研究

在体取样技术具有动物消耗少、减少动物个体差异和真实反映药物动力学过程的特点。目前以金属丝为载体的固相微萃取（Steel-SPME）在体取样技术存在萃取介质制备困难、种类有限、稳定性较差等缺点，针对该技术的瓶颈和难点，本项目提出络合作用-溶胶凝胶自组装法在金属丝表面制备功能化无机氧化物涂层（化学键合相、硅基分子印迹、限进介质），考察其萃取行为，阐明与目标物的作用机理，从制备方法和萃取介质上有所创新。并提出基于毛细管管内固相微萃取（In-tube SPME）的新型在体取样方法，设计取样时定位容易的接口和拓展萃取介质。In-tube SPME在体取样操作简便，毛细管易于和液相色谱连接，取样后可进行在线解吸进样，提高方法的灵敏度。本项目的实施将为获得生物相容性好、选择性高、抗基质干扰能力强和灵敏度高的SPME在体取样体系提供理论和实验依据，为研究药物动力学提供一种新技术，具有重要的理论和实用价值。

在体取样技术具有动物消耗少、减少动物个体差异和真实反映药物动力学过程的特点。固相微萃取（SPME）是一种新型的在体取样技术，以金属丝为载体的SPME(steel-SPME)为主。但是Steel-SPME在体取样技术存在萃取介质制备困难、种类有限、稳定性较差等缺点，针对该技术的瓶颈和难点，本项目主要进行了两方面的研究工作。第一部分以银丝为新型SPME载体，采用自组装-溶胶凝胶法在银丝表面进行功能化。通过Ag-S之间的特异性作用，在银丝表面自组装3-巯基丙基三甲氧基硅烷（MPTS），利用甲氧基与含有十二烷基三甲氧基硅烷（DTMOS）和四甲氧基硅烷（TMOS）溶胶溶液反应，得到C12涂层。为得到稳定、萃取性能良好的涂层，系统的考察溶胶溶液的组成以及涂覆条件，并对涂层进行了表征。以C12涂覆银丝作为SPME的萃取纤维，考察了对二苯甲酮类紫外吸收剂的萃取。对萃取时间、洗脱溶剂、洗脱时间、样品溶液盐含量和pH值等条件进行了优化，在最优萃取条件下进行了方法学考察，结果显示了很宽的线性范围、高的灵敏度、高的重现性等优势，并成功用于环境水中该类物质的检测。第二部分制备了一种基于表面活性剂限进型涂层的磁性纳米颗粒（MNP），并用于复杂体系中甾体激素类药物的分析。MNP经十二烷基三乙氧基硅烷键合生成C12-Fe3O4，C12-Fe3O4表面再用吐温（TW）-20（40，60，80）和司盘-40（60，80）两类非离子型表面活性剂进行涂覆，进行初步的萃取评价。结果表明吐温-20和吐温-40具有良好的抗干扰能力和较高的回收率，同时选取二者作为磁固相萃取（MSPE）吸附剂用于后续优化。实验系统的考察了萃取条件，在最优萃取条件下，所建立方法成功用于环境水样和尿液中目标物的分析。两种材料用于环境水样分析时回收率、重现性良好，检测限低。TW-20-C12与TW-40-C12相比，TW-20-C12在复杂生物样品中具有更好回收率，表明TW-20-C12生物相容性更高。这些工作为后期开展相关的应用奠定了良好的基础，项目进行到目前为止已发表SCI论文5篇，一篇在审稿中。