hCLP46通过葡萄糖基化修饰调控Notch信号通路的研究

Notch信号通路受到精确的糖基化修饰调控，O-岩藻糖基化修饰对其调控的机理已被阐明。O-葡萄糖基修饰的作用直到果蝇中葡萄糖基转移酶Rumi的发现才得以阐述，其在哺乳动物的相关研究还未见报道。本课题组鉴定的白血病异常表达基因hCLP46与Rumi具有同源性，推测其为哺乳动物的葡萄糖基转移酶，通过葡萄糖基化修饰Notch受体调控Notch信号通路。前期实验初步证实hCLP46能影响Notch1受体的激活。本项目拟采用体外糖基化试验和细胞试验，利用高效阴离子交换色谱脉冲-安培检测法、放射自显影、免疫印迹等手段，确定hCLP46的葡萄糖基转移酶活性，检测hCLP46在Notch1受体的合成和运输、Notch通路的激活及配体特异性等方面的作用，并探索hCLP46是否具有伴侣蛋白的功能。本研究将鉴定哺乳动物的葡萄糖基转移酶，探讨葡萄糖基化修饰在哺乳动物Notch信号通路调控中的作用。

Notch信号通路受到精确的糖基化修饰调控，决定细胞的命运选择。本课题组鉴定的白血病相关基因hCLP46， 又名Poglut1，是哺乳动物中唯一的O-葡萄糖基转移酶。其通过对Notch受体进行O-葡萄糖基修饰而调控Notch信号，从而调控机体的正常发育和疾病的发生发展进程。本项目在哺乳动物细胞中的研究结果表明： hCLP46过表达可以激活配体依赖的Notch信号，并通过抑制细胞周期依赖酶抑制因子（CDKI）的表达促进293TRex细胞增殖；基于我们发现的hCLP46 在急性髓性白血病和T-淋巴急性白血病病人以及白血病细胞系中高表达，因此推测hCLP46 可以作为白血病发病的潜在分子标记物；hCLP46调控依赖于配体的Notch信号通路，从而通过CDKI-RB信号通路调控髓系白血病细胞系U937细胞增殖；此外hCLP46还可以不依赖于Notch信号通路的方式增强TGFβ/Smad3信号，这些都可能是影响白血病发生的候选信号通路，可能作为白血病治疗的新基因靶点。