猪卵母细胞化学辅助去核方法的机制研究

目前体细胞核移植的效率还很低，影响体细胞核移植效率的因素很多，卵母细胞的去核效率是其中较关键的因素之一。因此，寻找一种最有效的去核方法一直是核移植研究中的热点。化学辅助去核法主要是利用脱羰秋水仙碱，对细胞骨架的松弛作用，破坏纺锤体的三维结构，使核凝集诱导卵母细胞表面产生含染色质的可见突起，从而准确显示卵母细胞核所在位置。去除该突起以及周围紧贴的细胞质即能可靠去核。这种去核方法去核率高，且吸出的胞质量很少，机械损伤小。另外，正常纺锤体的三维结构影响卵母细胞质内成熟促进因子(MPF)活性使这种去核方法受到研究者的关注，但有关化学辅助去核方法对MPF的影响未做系统的研究。本研究意在检测脱羰秋水仙碱处理的猪卵母细胞，在利用显微操作分离细胞质和细胞核后各部分MPF的含量。为理解化学辅助去核方法提供理论根据。

成熟卵母细胞中的成熟促进因子(MPF)与核移植胚的发育密切相关,它是影响核移植成功率的一个重要因素。化学辅助去核方法是用Demecolcine（DEME）预处理，使同源染色质凝集形成膜突起，很容易从卵母细胞表面去除，其损伤小，方法简单，因而备受关注。本研究通过检测DEME处理后MPF的活性, 为理解化学辅助去核方法对 MPF 的影响做出初步的研究,并对猪卵母细胞的发育潜能做出评价。通过研究也得到结论，DEME合理时间的处理增加了成熟卵母细胞内MPF的活性，有利于提高猪体细胞克隆的效率；化学辅助去核法去核率及重构胚囊胚发育率均高于普通去核法，证明由于DEME处理后影响了MPF的分布，使MPF的分布集中于细胞质中，极大限度的保留了去核卵母细胞MPF活性，更有益于体细胞核移植后期重组胚胎发育，明确阐明化学辅助去核方法的原理。