基于NF-κB/MAPKs信号通路探讨乳酸菌CS对AFB1毒素所致肝脏炎性损伤的保护机制

Aflatoxin B1 stimulates the animal liver release excessive inflammatory cytokines and cause liver damaged.Lactobacillus plays important role in regulating inflammatory factors.Our preliminary experimental results showed that lactobacillus CS has a good effect in preventing AFB1 poisoning,but its anti-inflammatory mechanism is not clear.Therefore, we will establish mouse model of AFB1 poisoning and isolate mouse kuppfer cell of liver for primary culture.The inflammatory cytokine of TNF-α、IL-1、IL-6 and IL-8 will be detected by ELISA and fluorescence quantitative PCR,and we will from the two angles of vivo and vitro to analysis the effect of antagonistic AFB1 from lactobacillus. The NF-κB/MAPKs（JNK、ERK、p38）signal pathway that may be involved in the anti-inflammatory mechanism will be deteced by Western Blot.Therefore, the research helps us to clear the regulation mechanism of antagonistic AFB1 from lactobacillus, and the results will have important guiding value for development of new drug in preventing AFB1.

黄曲霉毒素B1作用动物肝脏释放过量炎性因子从而导致肝脏受到损伤。乳酸菌具有调节炎性因子的作用，前期预实验筛选到乳酸菌CS具有良好的预防AFB1中毒效果，但其抗炎机制尚不清楚。因此，本研究结合前期实验建立小鼠AFB1中毒模型，并分离小鼠原代肝kupffer细胞。从体内、外两个角度通过ELISA和荧光定量PCR等方法检测乳酸菌CS拮抗AFB1毒素时对炎性因子（TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8）的影响，然后进一步通过Western Blot对其抗炎时可能涉及的NF-κB/MAPKs（JNK、ERK、p38）信号通路进行研究，从而明确乳酸菌CS拮抗AFB1所致肝脏炎性损伤的调控机制，其研究结果对开发防治AFB1中毒的新药物研究有重要指导价值。

黄曲霉毒素 B1 作用动物肝脏释放过量炎性因子从而导致肝脏受到损伤。乳酸菌具有 调节炎性因子的作用，在雏鸡动物实验中发现乳酸菌具有良好的预防 AFB1 中毒效果，但其抗炎机制尚不清楚。因此，进一步以小鼠为动物模型，建立小鼠 AFB1 中毒模型，并保 加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌分别刺激小鼠肝细胞（AMLA12）细胞。从体内、外两个角 度通过 ELISA 和荧光定量 PCR 等方法检测乳酸菌拮抗 AFB1 时对炎性因子的影响，然后 进一步通过 Western Blot 对其抗炎时可能涉及的 NF-κB 信号通路进行研究。 动物试验结果表明：AFB1 暴露小鼠肝组织出现明显病变，肝细胞部分坏死；肝指数 显著增加（P<0.05）；血清肝功指标 AST、ALT 含量显著上升（P<0.05），肝功指标 TP 及肾功指标 BUN、CREA 含量显著降低（P<0.05）；血清炎性因子 IL-1β、TNF-α、IL-6 水平显著升高（P<0.05，P<0.01），IFN-γ水平极显著下降（P<0.01）；肝脏炎性因子 TNF-α mRNA 表达量以及炎症信号通路中 NF-κBp65 mRNA 和蛋白表达量均极显著上调 （P<0.01），IκBα蛋白表达量极显著降低（P<0.01）。然而，添加保加利亚乳杆菌或鼠李 糖乳杆菌都不同程度的逆转了 AFB1 导致的上述指标的变化。在体外试验中，最终选择的 对 AML12 细胞活性没有显著影响的乳酸菌刺激剂量分别为：保加利亚乳酸菌 1.2 mg/mL， 鼠李糖乳杆菌 0.5 mg/mL。细胞试验结果表明：鼠李糖乳杆菌显著减少了 AFB1 诱导的 AML12 细胞胞外炎性因子的分泌；保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌都显著抑制了 AML12 细胞中 AFB1 导致的 NF-κB 的激活和表达以及 IL-1β、TNF-α的 mRNA 表达量。 以上结果表明，保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌均可通过调节 NF-κB 信号通路的活性 来拮抗 AFB1 导致的肝脏炎性损伤。其研究结果，在理论上，为初步明确乳酸菌拮抗 AFB1 所致肝脏炎性损伤的调控机制奠定了理论基础；在实践上，为对开发防治 AFB1 中毒的新 药物或饲料添加剂研究提供了实践依据。