中性粒细胞胞外捕获网在弥漫大B细胞淋巴瘤疾病进展中的作用及干预策略研究

Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is the most common subtype of aggressive non-Hodgkin’s lymphoma in adults. Approximately 30~40% of the patients experience disease progression or relapse after first-line therapy, and there is an urgent need for novel treatment strategies. Neutrophil extracellular traps (NETs) are three-dimensional reticular complexes released by neutrophils, which are composed of chromatin and biologically active proteins. Recent studies have shown that NETs are involved in tumor development and progression. Our preliminary research reveals that a high level of NETs in tumor tissues is significantly associated with advanced clinical stage and poor prognosis in patients with DLBCL. In addition, cytokines secreted by DLBCL cells may be responsible for the up-regulation of NETs, and NETs may exert its tumor-promoting effect via Toll-like receptor 9 (TLR9). In the current project, we will (1) identify the key cytokines responsible for the regulation of NETs production in DLBCL; (2) investigate the effects and corresponding mechanisms of NETs on the biological behavior of DLBCL, especially the role of TLR9 and its downstream signaling pathways; and (3) evaluate the therapeutic effects of NETs-targeted interventional approaches in DLBCL, with a major goal to lay a foundation for the development of novel therapeutic targets for this disease.

弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）是最常见的成人侵袭性非霍奇金淋巴瘤。约30~40%的患者在一线治疗后进展或复发，亟需新的治疗策略。中性粒细胞胞外捕获网（neutrophil extracellular traps，NETs）是由中性粒细胞释放的包含染色质和生物活性蛋白的三维网状复合体，最近研究发现其参与肿瘤发生发展。我们前期研究显示肿瘤中高水平NETs与DLBCL患者分期晚和预后不良显著相关，DLBCL细胞可能通过分泌细胞因子上调NETs生成，而NETs可能藉由Toll样受体9发挥促肿瘤作用。本研究将承前启后，进一步揭示DLBCL调控NETs水平的关键细胞因子；阐明NETs对DLBCL生物学行为的作用及机制，特别是TLR9及其下游信号通路的地位；检验NETs靶向干预策略对DLBCL的疗效，为发现新的治疗靶点提供理论基础和实验依据。

背景：弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）疗效欠佳，亟待新的治疗靶点。中性粒细胞胞外捕获网（NETs）可能在DLBCL的进展中扮演重要角色。.研究内容：DLBCL患者肿瘤组织和血浆中NETs的含量及其临床和预后价值；通过体外增殖实验、迁移实验等功能实验以及动物模型验证研究促进DLBCL进展的作用机制；利用Transwell共培养模型、细胞因子芯片、ELISA、免疫荧光等体外实验以及移植瘤模型研究DLBCL诱发NETosis的机制..结果： DLBCL患者肿瘤组织和血浆中的高NETs水平是PFS和OS的独立不良预后因素。NETs可以促进人源性DLBCL细胞株（SU-DHL2, SU-DHL4, SU-DHL6）以及鼠源性DLBCL细胞株（A20）的增殖及迁移，且加入DNase I或NEi可显著降低NETs的促癌效应。在荷瘤小鼠模型中，DNase I或NEi抑制了原位肿瘤的生长以及同侧腋窝淋巴结的转移。NETs可明显上调DLBCL细胞中TLR9的表达，TLR9可识别NETs中的DNA，并通过激活下游的NF-κB、MAPK和STAT3信号通路促进DLBCL的增殖及迁移。阻断TLR9信号轴可有效地抑制DLBCL生长。只有人源性SU-DHL2细胞株和鼠源性A20细胞株可以促进相同属性的中性粒细胞发生NETosis。细胞因子芯片筛选、ELISA检测以及NETosis诱导实验提示SU-DHL2通过高分泌IL-8促进中性粒细胞产生NETs。高分泌IL-8的DLBCL细胞株RC-K8以及原代DLBCL细胞同样可以诱导NETs形成。机制上，IL-8主要是通过与中性粒细胞表面的CXCR2结合后，上调Src、p38等通路诱导NETosis。.结论及意义：本课题首次系统地阐释了NETs对DLBCL影响：NETs是DLBCL的独立不良预后因素；NETs对DLBCL具有促癌作用，而DLBCL本身又可以诱导中性粒细胞产生NETs；机制上，部分DLBCL具有高分泌IL-8的能力，这种细胞因子可通过与中性粒细胞表面的CXCR2受体结合、激活下游Src、p38等通路进而诱发NETosis，新形成的NETs被肿瘤细胞的TLR9感知后，细胞内部的NF-κB、MAPK和STAT3信号通路激活，促进了DLBCL的增殖和迁移。阻断NETs与肿瘤细胞之间相互作用的重要节点因子是极具潜力的治疗靶点。