HBsAg及BCR信号通路在HBV相关弥漫大B细胞淋巴瘤中的作用机制及干预研究

An epidemiologic association between chronic hepatitis B virus (HBV) infection and lymphoma has been confirmed by a large number of studies. Our previous study showed that HBsAg-positive diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) displayed distinct clinical features and significantly worse outcome. Our further analysis of B-cell receptor (BCR) variable region genes strongly suggested that HBV-associated DLBCL might arise from HBsAg-selected B cells. Based on these results, we hypothesize that the BCR activation by HBsAg might be a major oncogenic driver and might become a rational therapeutic target in HBV-associated DLBCL. In this study, we will examine the expression of phosphoproteins by immunohistochemistry to explore the activation status of BCR signaling pathway. The affinity between BCR and HBsAg, as well as the levers of both intracellular calcium concentration and mRNA associated with BCR signaling pathway after their engagement will be detected to determine whether the BCR activation is due to HBsAg binding. The BCR component mutations which may result in constitutive BCR signaling pathway activation will be tested by next generation sequencing. Moreover, we will examine the impact of HBsAg and BCR inhibitors on tumor cell proliferation in primary tumor cells and Patients derived xenograft models. The aims of this study are to elucidate the role of HBsAg and BCR signaling pathway in the pathogenesis of HBV-associated DLBCL, to identify effective BCR inhibitors, and to offer promising new therapy options for both GCB and non-GCB subtypes of HBV-associated DLBCLs.

大量流行病学证据显示慢性HBV感染人群B细胞淋巴瘤的发病风险增高。我们前期工作发现HBsAg血清学阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）临床表现特殊，预后极差，并且B细胞受体（BCR）分析提示淋巴瘤起源于对HBsAg起反应的B细胞克隆。据此提出，HBsAg可能通过活化BCR信号通路促进HBV相关DLBCL的发生、发展，并可能成为治疗靶点。本项目将检测HBsAg阳性DLBCL肿瘤组织BCR信号通路磷酸化蛋白的表达确定其活化状态；检测BCR与HBsAg的亲和力，二者结合后细胞内钙离子和BCR通路mRNA水平变化，以及有无BCR组分突变致BCR组成性活化，从而确定BCR信号通路活化机制；利用原代肿瘤细胞和PDX模型研究HBsAg及BCR抑制剂对瘤细胞增殖的影响；以期阐明HBsAg和BCR信号通路在不同亚型HBV相关DLBCL中的作用机制，并筛选出有效的BCR抑制剂，为发掘治疗新策略提供科学依据。

大量流行病学证据显示慢性HBV感染人群B细胞淋巴瘤的发病风险增高，但尚缺乏我国大样本流行病学数据，同时HBV相关淋巴瘤的发病机制及肿瘤的分子生物学特征均研究较少。本课题围绕HBV相关B细胞非霍奇金淋巴瘤这一具有我国地域特点，预后差，目前认知尚不足的临床问题，对HBV相关B细胞淋巴瘤的流行病学特点及分子生物学特点进行了深入研究，结果包括：1）通过一项病例对照研究（4366例淋巴瘤和18750例对照组病例）发现病例组HBsAg阳性率高于对照组(8.6% vs 5.0%, p<0.0001)，HBsAg阳性人群淋巴瘤发病风险增高27%(OR 1.27)，证实了我国HBV感染和淋巴瘤相关，且主要与B细胞来源的淋巴瘤，如DLBCL，MZL，以及HL相关（OR值分别为2.154，2.09，1.688）；2）BCR组库分析显示和HBsAg阴性B-NHL相比，HBsAg阳性B-NHL在IGHV和IGHD基因应用上具有偏向性，更倾向于应用IGHV1-69, IGHV3-21, IGHV3-30以及IGHD6-6；Blast分析显示HBsAg阳性B-NHL肿瘤性BCR重链CDR3氨基酸序列和HCV相关的淋巴瘤、B细胞增值性疾病、自身免疫病相关CDR3序列相似度高；3）RNAseq检测显示HBsAg阳性HBsAg阴性DLBCL病例存在差异性表达基因，包括171个基因mRNA转录上调和762个基因mRNA转录下调，两组间BCR信号通路基因均高表达，但趋化因子信号途径，ABC转运等存在差异；RNA测序初步分析显示HBsAg阳性DLBCL无CD79a，CD79b，CARD11，MYD88突变，但存在NFKBIE，FOXO1，MYC，IRF8，PTPN6，HIST1H1E等基因突变，同时CTLA4/CD8水平更高；4）制备了HBsAg阳性DLBCL的原代肿瘤细胞及PDX模型。.本课题研究结果高度提示HBV相关B-NHL肿瘤性克隆的抗原识别较之前认知的更为复杂，抗原刺激和克隆选择可能是HBV相关B细胞淋巴瘤发病的早期事件，而B细胞克隆的进一步恶性转化可能与随后的遗传学及肿瘤免疫微环境异常相关。上述结果提高了对HBV相关DLBCL的生物学特点的认识，为后续研究HBV相关淋巴瘤的发病机制，寻找新的治疗靶点并最终改善HBV感染相关淋巴瘤患者的预后提供了重要的理论和研究基础，具有一定的社会及经济学意义。