基于滤泡辅助性T细胞和B细胞免疫调节的乙型肝炎病毒抗原血清学转换的机制研究

The seroconversion of hepatitis B virus antigen after treatment or spontaneously is an important sign of the humoral immune response after HBV infection, T follicular helper cells (TFH) are B cell antigen-presenting cells, play an important role during antibody production,however the immunological mechanism is unknown. We have demonstrated that the quantity of TFH in hepatitis B patient significantly increased during immune clearance phase, and its quantity and function influenced seroconversion of HBeAg. For further research, we also found the quantity of TFH was positively correlated with HBeAb concentrations and negatively correlated with HBsAg concentrations. In order to validate whether the disorder of TFH function induces B cells to secrete lower antibody, we do our research in four parts below: ①With polychromatic streaming technology analysis for the quantity, the function and the new specific phenotype of TFH in patient with chronic hepatitis B. ②Using Transwell system combination with live-cell imaging system to identify the mechanism of TFH cells on the role of B cells.③Dynamical analysis of interferon therapy in patients with TFH cells on the role of B cells and the correlation of markers for HBV antigen and antibody.④Further proving the TFH cells on the role of B cells with HBV infected animal model, and observing change of markers for HBV antigen and antibody after intervention regulation. In order to clarify the influence of TFH cells on the role of B cells function and differentiation state, our research have new understanding in the serological conversion mechanism of hepatitis B virus antigen and propose an new idea for blocking HBV chronic infection.

自发或经治疗后发生HBeAg/HBsAg血清学转换是HBV感染机体后体液免疫应答的重要标志。滤泡辅助性T细胞(TFH)是B细胞的抗原递呈细胞,在抗体产生中发挥重要作用，但其作用机制不清。我们已证明免疫清除期TFH数量和功能显著增高,影响HBeAg的血清学转换，且与HBeAb正相关,与HBsAg负相关。为明确TFH在乙肝患者体液免疫中的作用，拟进行:①检测HBV感染者TFH的数量、功能及特异表型②Transwell结合活细胞成像系统探讨TFH作用于B细胞的机制③动态分析干扰素治疗后患者TFH功能改变及与HBV抗原、抗体的相关性④HBV感染动物模型进一步明确TFH的作用机制,并在实施干预调控后,观察HBV抗原抗体变化情况。本课题旨在以明确TFH对B细胞的作用机制为切入点,对HBV感染者抗原血清学转换有新的认识。初步阐明HBV感染后机体的特异性体液免疫应答机制,为阻断HBV慢性感染提供新思路。

项目的背景：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染呈世界性分布，严重威胁着人类健康。HBV感染人体后，机体的免疫状态决定人体是否发病以及病情严重程度。细胞免疫在HBV的清除中起着重要作用，但此免疫应答也成为肝损伤的主要发病原因。体液免疫，尤其是以中和抗体为主的保护性抗体，则在阻断病毒感染、抑制病毒复制的过程中发挥着关键作用，乙肝患者如能实现乙肝病毒E抗原（HBeAg）甚至是乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的血清学转换（抗原下降，抗体产生），并得以长期维持，将可能彻底清除病毒并防止其再次入侵。但目前HBV感染后机体的特异性体液免疫应答机制及调控方式尚不清楚。.主要研究内容：①乙型肝炎免疫应答过程中TFH细胞的数量、功能状态及特异性表型与各项临床指标的关系；②通过采集HBV感染者临床标本，建立体外培养刺激的活体Transwell体系，运用流式细胞术、免疫印迹、活细胞荧光成像系统等手段及技术，探讨HBV临床感染状态下，TFH细胞对B细胞增殖、存活、抗体分泌和细胞因子分泌以及表型的影响；③研究不同免疫应答状态下的TFH细胞对B细胞的增殖、存活、抗体分泌和细胞因子分泌及与乙肝病毒抗原、抗体标记物的相关性；此外，我们还利用乙肝病毒感染动物模型，结合肝脏病理进一步证实TFH对B细胞的调控作用。.重要结果： ①研究发现TFH细胞不仅可以通过IL-21的途径辅助B细胞，也可以直接接触辅助B细胞产生抗体。②研究证明发生E抗原转换的乙肝患者体内TFH细胞数量显著增高，其数量和功能影响HBeAg的血清学转换。③TFH细胞的CD40L比ICOS具有更强的刺激B细胞分化及抗体产生的能力。④乙肝患者在规范性治疗后，CD40L+CD4+CXCR5+ TFH细胞亚群比ICOS+TFH细胞亚群在促进乙肝表面抗体产生的过程中起到更重要的作用。⑤治疗后转基因小鼠肝脏组织的HBsAg和HBeAg的表达也均降低，炎性细胞浸润也明显减少。.关键数据及其科学意义：本项目以明确TFH对B细胞的作用机制为切入点，初步阐明HBV感染后机体的特异性体液免疫应答机制，对HBV感染者抗原血清学转换有新的认识，为阻断HBV慢性感染提供新思路。