67LR在脓毒症中的作用及其机制研究

Our previous studies have found that matrine derivative MASM exhibits a significant anti-inflammatory effect and is effective in treatment of sepsis. Furthermore, MASM specifically binds to cell membrane receptor 67LR, and 67LR antibody can reduce the inhibitory effect of MASM on macrophage, suggesting that the effect of MASM may be mediated by 67LR. Using 67LR knockout mice, we found that 67LR knockout significantly reduced inflammatory cell infiltration and tissue injury in septic mice. The data, both from MASM-related studies and from biology studies as shown above, suggest that 67LR may play an important role in the occurrence and development of sepsis. This project is designed to use 67LR gene knockout mice, 67LR antibody, MASM and 67LR inhibitors to investigate whether the knockout/ block/inhibition of 67LR could reduce the migration of inflammatory cells, decrease the production of cytokines, and inhibit the activation of related signal pathways in experiments on cells, and to investigate whether the knockout/block/inhibition of 67LR could diminish inflammation in multiple organs, alleviate tissue damage, improve survival, and show significant prevention and treatment effects on septic mice. Meanwhile, we may obtain another evidence to support that the effect of MASM is mediated by 67LR. Moreover, we plan to explore the signal pathways in the downstream of 67LR to further clarify the role of 67LR in the pathogenesis of sepsis. Collectively, this project is expected to provide new targets and new therapeutic agents for the treatment of sepsis.

我们前期研究发现苦参碱衍生物MASM具有显著的抗炎作用并能有效治疗脓毒症，新近又发现其特异性结合细胞膜受体67LR，且67LR抗体能明显减弱MASM抑制巨噬细胞的作用，提示MASM可能通过67LR发挥作用。应用67LR基因敲除小鼠研究发现67LR敲除明显减轻脓毒症小鼠脏器的炎性细胞浸润和组织损伤。药物和生物学两方面数据均提示67LR可能在脓毒症发生发展过程中起重要作用。本项目计划应用67LR基因敲除小鼠、67LR抗体、MASM以及67LR抑制剂，考察67LR敲除/封闭/抑制剂在细胞水平是否抑制炎性细胞的迁移、细胞因子的产生和相关信号通路的激活，在整体动物水平是否减轻脓毒症小鼠的多器官炎症和组织损伤、提高生存率、显示明显的预防和治疗作用；确证MASM通过67LR发挥作用；探索67LR下游的信号通路，进一步阐明67LR影响脓毒症病理过程的作用机制。本研究有望为脓毒症治疗提供新的靶点和治疗药物。

脓毒症（sepsis）是机体对感染的反应失调而导致的危及生命的器官功能障碍，是感染致死的直接原因和最主要原因，在临床属于急重症，具有极高的病死率，临床至今仍缺乏特异性治疗药物。我们前期研究发现苦参碱衍生物MASM具有显著的抗脓毒症作用，其特异性结合细胞膜受体是67LR，67LR抗体能明显减弱MASM抑制巨噬细胞的作用，提示MASM可能通过67LR发挥作用，67LR可能在脓毒症发生发展过程中起重要作用。在本项目中我们系统研究了67LR在脓毒症中的作用及其机制。我们研究发现小鼠脓毒症时，67LR在髓系细胞如中性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞和树突状细胞上表达显著下调。髓系细胞67LR敲除对小鼠的生长和免疫细胞数目无显著影响。同时应用CLP模型和LPS模型，研究发现髓系细胞67LR敲除能提高脓毒症小鼠的生存率，保护脓毒症小鼠的肺、肝、肾、脾和小肠等器官。髓系细胞67LR敲除使脓毒症小鼠组织中巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞的浸润减少，组织细胞损伤减轻，更多细菌被机体清除，髓系细胞67LR敲除全面改善了脓毒症小鼠的病理状态。巨噬细胞67LR在脓毒症中发挥重要作用。67LR敲除降低了巨噬细胞的迁移功能，改善了LPS处理或脓毒症导致的巨噬细胞吞噬功能下降。我们取小鼠的腹腔巨噬细胞利用RNAseq技术探讨67LR敲除抗脓毒症的分子机制，发现了因67LR敲除导致的差异表达基因，为深入的分子机制研究奠定了工作基础。此外，应用67LR过表达的巨噬细胞研究发现67LR过表达后巨噬细胞杀灭病原菌的能力减弱，回输至小鼠，脓毒症小鼠的器官损伤加重，所有研究结论与67LR敲除的结果相符。MASM能通过67LR影响巨噬细胞的功能，发挥抗脓毒症作用。MASM的抗脓毒症作用非常明确，对脓毒症后期白念珠菌的二次感染也有防治作用。67LR有望成为脓毒症治疗的靶点，MASM有望成为治疗脓毒症的候选药物。