Cbl-b在烟草烟雾诱导的慢阻肺发病中的作用及机制研究

Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is a chronic respiratory disease. The only one identified to be associated with COPD is the mutation in the alpha antitrypsin gene, which occurs mainly in Western countries and rare in China. Our previous study found that rs61758360, located in Cbl-b gene, is closely related to the incidence of COPD in China for the first time and the expression of Cbl-b protein is significantly up-regulated in the lung tissue of cigatette induced mice. In this study, Cbl-b knock-out mice were used to establish a cigarette-induced COPD mouse model in vivo experiments. The lung function and pulmonary emphysema index were measured to evaluate the COPD model. The inflammatory factors were detected by ELISA and the proteases/anti-proteases were detected by q-PCR, western blot and immunohistochemistry to investigate whether Cbl-b participates in the development of COPD from the inflammatory pathway or/and proteases/antiproteases balance. In vitro, small interfering RNA, overexpression vectors and immunoprecipitation were used to explore the mechanism of Cbl-b on the devolepment of COPD and whether the rs61758360 a functional SNP . Therefore, we can provide new ideas for COPD prevention and treatment.

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种的慢性呼吸系统疾病。目前唯一确定与COPD相关的是α抗胰蛋白酶基因发生突变，但这种现象主要在西方国家出现，中国很少见。我们前期研究首次发现SNP位点rs61758360（位于Cbl-b）与中国COPD人群发病紧密相关，且在熏烟小鼠的肺组织中Cbl-b蛋白表达明显上调。本研究利用Cbl-b基因敲除小鼠，建立香烟诱导的小鼠COPD模型：检测小鼠肺功能、测量肺气肿指数评估COPD模型；通过ELISA检测炎症因子，同时采用q-PCR、western blot、免疫组化等方法检测蛋白酶/抗蛋白酶的含量等变化研究Cbl-b是否从炎症途径以及蛋白酶/抗蛋白酶平衡参与COPD的发生发展。在体外细胞模型，利用小分子干扰RNA、过表达技术以及免疫共沉淀等方法探索Cbl-b影响COPD发生发展的机制并验证rs61758360是否为功能性位点，为COPD防治提供新的思路。

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种的慢性呼吸系统疾病。目前唯一确定与COPD相关的是α抗胰蛋白酶基因发生突变，但这种现象主要在西方国家出现，中国很少见。我们前期研究首次发现SNP位点rs61758360（位于CBLB）与中国COPD人群发病紧密相关，且在熏烟小鼠的肺组织中CBLB蛋白表达明显上调。本研究利用CBLB基因敲除小鼠，建立香烟诱导的小鼠COPD模型：检测小鼠肺功能、测量肺气肿指数评估COPD模型；通过ELISA检测炎症因子，同时采用q-PCR、western blot、免疫组化等方法检测蛋白酶/抗蛋白酶的含量等变化研究CBLB是否从炎症途径以及蛋白酶/抗蛋白酶平衡参与COPD的发生发展。在体外细胞模型，利用小分子干扰RNA、过表达技术以及免疫共沉淀等方法探索CBLB影响COPD发生发展的机制并验证rs61758360是否为功能性位点，为COPD防治提供新的思路。结果：1、敲除CBLB促进CS诱导的小鼠COPD模型肺功能下降。 2、敲除CBLB加重CS诱导的小鼠COPD模型肺部炎症、气道重构及肺气肿。 3、敲除CBLB促进CS诱导的小鼠COPD模型肺部巨噬细胞及淋巴细胞浸润。4、敲除CBLB导致MMP9/TIMP1失衡。5、与野生型过表达载体相比，过表达点突变型（rs61758360位点）CBLB能够上调TIMP1表达以及下调MMP9表达。结论：敲除CBLB促进CS诱导的COPD的发生发展，CBLB可能可以通过抑制MMP9/TIMP1失衡，从而对COPD的发生发展起到保护作用，rs61758360位点对于COPD的发生发展是一个功能性保护位点。本研究为COPD的发病机制及早期防治提供了新的思路。