抑制血小板功能对动脉粥样硬化炎症的影响及分子机制研究

Recent a number of studies showed that platelet release is a key role in atherosclerosis. Therefore, the inhibition of platelet functions can reduce inflammation in atherosclerosis. Our studies found that ginkgolide B, an inhibitor of platelets function, decreased inflammatory proteins and aortic lesions in ApoE defective mice (ApoE-/- mice). In the current study, we will investigate that the effect of ginkgolide B on platelet released proteins by proteomic analysis; the effects of ginkgolide B on junction proteins in endothelial cells; the effects of ginkgolide B on Nrf/HO-1 pathway in platelets and in endothelial cells; the effect of platelets on endothelial cells in flow conditions.Moreover, we will determine the exprssion of VCAM-1, ICAM-1 and PECAM-1 in endothelial cells. The study will demonstrate that the role of platelets in athrosclerosis and inflammation.The results will offer a therapeutic potential of ginkgolide B in prevention and treatment atherosclerosis.

近年研究显示，血小板释放炎症蛋白在动脉粥样硬化炎症中是一个十分重要的环节，这提示抑制血小板功能有可能改善动脉粥样硬化的炎症状态。我们的前期工作发现血小板功能抑制剂银杏内酯B，能够明显抑制ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样斑块形成以及血管炎症，并降低血清炎症蛋白水平。本课题拟利用蛋白组学方法分析银杏内酯B抑制血小板释放的蛋白产物；评价其对内皮细胞连接蛋白GAP、JAM-C、ZO-1，以及对血管渗透性的影响；评价其对细胞内源性抗氧化通道Nrf2/HO-1的影响；利用数控微流（Bioflux）的技术手段，评价其在不同的剪切应力条件对流动状态的血小板与内皮细胞之间的相互作用，以及内皮细胞粘附蛋白VCAM-1,ICAM-1和PECAM-1表达变化。通过这一研究揭示血小板功能变化在动脉粥样硬化炎症中的作用以及分子机制，研究结果将为动脉粥样硬化的防治提出理论和实验依据。

本课题探讨了抑制血小板功能对动脉粥样硬化炎症的影响及分子机制的研究，分析了thrombin刺激血小板释放的炎症蛋白变化。蛋白组学分析发现，抑制血小板PAF受体拮抗剂银杏内酯B能够抑制血小板聚集以及下调多种血小板释放蛋白，其中具有3倍差异的蛋白有37个，包括S100A9，PPBP，TF等，表明通过抑血小板释放反应能够减少炎症蛋白，对血管具有保护作用。对血管内皮细胞的研究表明，银杏内酯B能够抑制ox-LDL诱导的LOX-1表达（ox-LDL受体），其分子机制与抑制内皮细胞Akt 磷酸化相关。我们的研究还表明银杏内酯B能够增加内皮细胞的保护分子Sirt1表达。当ox-LDL刺激内皮细胞时Sirt1表达降低，银杏内酯B能够逆转这一现象。这些结果发表在PLOS ONE (2013)。.对内皮细胞黏连蛋白的研究表明，当ox-LDL刺激内皮细胞时连接蛋白JAM-A,Cx43和VE-cadherin表达增加，但ZO-1变化不明显。银杏内酯B干预能够降低这些被ox-LDL诱导增加的连接蛋白表达。进而，我们用transwell实验观察了单核细胞在内皮细胞迁移，发现ox-LDL处理的内皮细胞中，单核细胞迁移数量较多，而银杏内酯B减少了单核细胞迁移。我们观察到用siRNA 分别敲除JAM-A,Cx43和VE-cadherin基因，同样看到单核细胞迁移减少的现象。表明银杏内酯B能够通过抑制这些连接蛋白表达改善血管的渗透性。这部分结果发表在Oxid Med Cell Longev. （2015）。.我们用Bioflux 在不同的剪应力条件下培养内皮细胞，观察银杏内酯B对内皮细胞的保护作用，结果表明，在1达因和9达因两种不同的生物力作用下，用TNF-α诱导内皮细胞损伤，银杏内酯B对其诱导的VCAM-1, Cx43 以及VE-cadherin均有抑制作用。这一结果也支持了我们在静止条件下培养内皮细胞的结果。.综上所述，我们的研究表明抑制血小板功能能够降低血小板释放的炎症产物，银杏内酯B不仅抑制血小板功能，对内皮细胞的炎症反应也具有保护作用。抑制血小板可以成为减轻或延缓动脉粥样硬化进展的疗法策略之一。