Delta 阿片受体激动剂后处理对缺血性脑损伤的保护作用及其机制研究

针对围手术期脑缺血脑损伤致残率高，影响生活质量的临床问题，本项目在先前发现delta阿片受体激动剂预处理对全脑缺血和原代皮层神经元的缺氧复氧损伤具有明确保护作用的基础上，为解决预处理仅对可预见的脑缺血有意义而临床发生脑缺血事件多为不可预见的现状，根据delta阿片受体激动剂DADLE后处理对全脑缺血有保护效应的预实验结果，提出delta阿片受体激动剂后处理对缺血性脑损伤具有保护作用的科学假说，由于缺血后处理脑保护作用的机制与PI3K/Akt途径相关，预实验发现PI3K抑制剂能够明显削弱delta阿片受体激动剂后处理的脑保护效应，提示其作用可能与该通路相关。本课题拟采用体外培养皮层神经元的缺氧复氧损伤模型和大鼠全脑缺血模型，研究delta阿片受体激动剂后处理对缺血性脑损伤的保护作用及其信号转导通路，为临床筛选脑保护药物提供新的靶点。

脑缺血是以脑局部或整体循环血流量减少为特征的中枢神经系统疾病，其中围术期脑缺血致残率高，严重影响病人的生活质量。目前能够有效治疗或预防缺血后脑损伤和神经功能障碍的方法还十分有限。以往缺血预处理可以通过诱导机体的内源性保护机制减轻脑缺血/再灌注损伤，但由于脑缺血的不可预见性，其临床应用则十分有限。近年来人们发现缺血后处理同样可以诱导相似的保护作用，同时一些药物，例如预处理的生理性刺激物（阿片类物质，缓激肽等）也可以模拟缺血后处理而发挥保护作用，称之为药物后处理。.DADLE，一种人工合成的非选择性δ-阿片受体激动剂，可以有效地诱导夏季活跃的冬眠动物进入冬眠状态。而δ-阿片受体作为冬眠与神经保护机制的纽带，引起人们对缺血/再灌注中δ-阿片受体作用机制的研究。我们研究组先前研究发现δ-阿片受体激动剂DADLE预处理对于全脑缺血和原代皮层神经元的缺氧复氧损伤具有明确的保护作用。而DADLE对于全脑缺血是否也能发挥药物后处理的保护作用还不清楚。因此本课题首先从δ-阿片受体激动剂DADLE后处理对缺血性脑损伤是否具有保护效应出发进行一系列研究，并对其机制进行初步探讨。第一部分实验通过建立大鼠短暂全脑缺血动物模型，观察DADLE后处理是否对缺血性脑损伤具有脑保护作用，并推测其机制可能和PI3K/Akt通路有关。第二部分研究星形胶质细胞反应在DADLE后处理脑保护作用过程中的表现。通过免疫组化技术观察p-Akt及其主要下游蛋白active caspase-3的表达和分布研究，我们发现星形胶质细胞活化可能发挥着重要的作用。通过研究全脑缺血以及DADLE后处理海马星形胶质细胞的形态学变化，以及不同蛋白表达的空间分布及细胞定位，结果提示DADLE后处理保护作用可能与促进星形胶质细胞活化、Akt磷酸化活化以及抑制胶质增生或诱导凋亡有关。基于以上研究，第三、四部分我们分别从神经行为学角度，以及缺血诱导的神经干细胞增殖、分化等角度探讨DADLE后处理对缺血后神经发生的影响。这些研究将对于临床上寻找新的有效方法以减轻脑缺血损伤提供必要的基础理论，具有重要的现实意义