系统性红斑狼疮易感基因TNFAIP3、TNIP1的作用机制研究

Systemic lupus erythematosus(SLE) is a polygenic inheritance disease. Among the integral components of SLE pathology, the signal transduction of abnormal activation of T and B cells and subsequent immune disfunction play the key roles on the pathogenesis of SLE. NF-κB is an important regulator of inflammation and apoptosis. The abnormal activation ,proliferation and fuction of B cells resulting from overactivity of NF-κB pathway are related to the occurrence and development of SLE. Studies have verified that TNFAIP3 and TNIP1 can negatively regulate NF-κB pathway. Recent GWA ,Case-contorl studies and our previous research demonstrated that TNFAIP3 and TNIP1 are the susceptible genes of SLE. In the present study, to investigate whether and how TNFAIP3 and TNIP1 affect activation,proliferation and function of B cells and activity of NF-κB pathway in cell,molecular and transcription levels, We will conduct TNFAIP3 and TNIP1 gene-transfection in SLE B cells mediated by the lentiviral expression vector,then test survival and apoptosis rates of B cells,the ratio of plasma cells to B cells,the expression levels of TNFAIP3,TNIP1,TLR7,TLR9,BCR and CD40.We will also establish TNFAIP3 and TNIP1 promoter-driven luciferase reporter gene vector to detemine the activity of promoters of these two genes.

系统性红斑狼疮（SLE）的发生发展与NF-κB信号通路过度活化所致T、B细胞异常活化以及免疫功能异常密切相关，而TNFAIP3、 TNIP1具有负性调节NF-κB信号通路的作用。近来不同地区人群GWAs和候选基因研究以及申请人前期工作已证实TNFAIP3和TNIP1为SLE易感基因，但相关基因功能研究少见报道。本研究拟采用双荧光素酶报告基因系统分别检测SLE患者TNFAIP3和TNIP1基因启动子、增强子活性，并用慢病毒表达系统转染SLE患者及正常人B细胞后测定TNFAIP3和TNIP1 mRNA水平，同时测定B细胞表型，存活和凋亡率，浆细胞比值，NF-κB活性，各种表面活性信号分子及狼疮"血清标志物"水平，分别从转录调控，基因表达和细胞、分子水平探讨TNFAIP3和TNIP1基因通过何种机制影响SLE患者B细胞活化、增殖、分化、存活和凋亡，以及对核因子信号转导系统活性及各组分的作用机制。

SLE的发生发展与NF-κB信号通路过度活化所致T、B细胞异常活化以及免疫功能异常密切相关，而TNFAIP3、 TNIP1具有负性调节NF-κB信号通路的作用。申请人前期工作已证实TNFAIP3和TNIP1为SLE易感基因。本研究采用慢病毒转染SLE患者及正常人B细胞后测定TNFAIP3和TNIP1 mRNA水平，同时测定B细胞各种表面活性信号分子及狼疮“血清标志物”水平，分别从转录调控，基因表达和细胞、分子水平探讨TNFAIP3和TNIP1基因通过何种机制影响SLE患者B细胞活化、增殖、分化、存活和凋亡，以及对核因子信号转导系统活性及各组分的作用机制。结果显示：⑴ TNFAIP3基因的异常表达提示该基因通过调节B细胞的成熟和分化可能是SLE的发病机制之一。⑵TNFAIP3基因可以通过泛素化修饰和非泛素化修饰作用抑制TLR7/TLR9-NF-κB信号通路的激活。而当TNFAIP3基因突变或缺陷时，A20可以通过去泛素化作用于TRAF6并激活下游的NF-κB通路。⑶ TNFAIP3基因过表达明显地抑制TLR7/9表达上调，反之亦然。这提示NF-κB可以调控TLR7/9的表达，NF-κB可能通过正反馈机制加重沉默状态下A20诱发的组织炎症损伤，并最终诱发SLE等自身免疫性疾病。⑷本课题研究发现TNIP1在系统性红斑狼疮患者中表达异常，由于SLE致病机制较复杂，且TNIP1在外周血淋巴细胞中的表达受多种因素的影响，表达差异的具体原因、机制还有待于进一步研究，但实验结果可以提示我们，TNIP1基因与SLE的发病机制明显相关。⑸采用过表达B细胞TNIP1基因，能够成功上调TNIP1 mRNA的表达，过表达B细胞中TNIP1基因可导致B细胞中TLR7 mRNA表达下调，TLR9 mRNA表达上调，提示TNIP1基因可能通过某种分子信号途径参与调控B细胞中TLR7、TLR9的表达。⑹RNA干扰有效沉默SLE患者及正常人B细胞中TNIP基因，能有效抑制TNIP1 mRNA的表达，干扰B细胞TNIP1基因可导致TLR7 的表达反而上调，TLR9表达反而降低，更进一步提示B细胞活化标志分子TLR7、TLR9表达水平的改变可能与TNIP1有关。TNIP1基因不影响B细胞的生长、存活。