CYP4F2转基因高血压小鼠IDH1代谢途径研究

本项目对前期建立的CYP4F2转基因高血压小鼠展开氧化应激水平评估，并将氧化应激基因芯片筛查到的IDH1作为靶基因，展开转基因小鼠IDH1/α-KG代谢途径相关研究。以CYP4F2转基因小鼠为主要研究对象，辅助细胞模型，探讨CYP4F2/20-HETE对IDH1表达、酶活及α-KG代谢产物的抑制作用，并检测α-KG是否通过受体GPR99，改变了RAS等血管舒缩因子的水平，从而参与转基因小鼠高血压的发生，揭示CYP4F2/20-HETE致高血压的一种新的机制。最后通过收集大样本的高血压病例-对照，在人群中验证α-KG与20-HETE及高血压的相关性。

本项目围绕CYP4F2转基因高血压小鼠氧化应激及IDH1/α-KG代谢途径展开研究。对CYP4F2转基因小鼠给予抗氧化剂、20-HETE特异性抑制剂等处理，检测血尿氧化应激标记物并测量血压，证明转基因小鼠存在氧化应激，抑制20-HETE有效缓解氧化应激，抗氧化药物改善小鼠高血压表型；转基因小鼠IDH1基因的表达下调；转基因小鼠血浆及尿液IDH1代谢产物α-KG生成也减少。体外培养HEK293细胞并施加20-HETE刺激，氧化应激标记物检测提示20-HETE诱发氧化应激，抑制20-HETE阻断氧化应激；20-HETE刺激后细胞IDH1基因的表达下调；细胞培养液中IDH1代谢产物α-KG生成减少。高血压病例组尿α-KG水平略低于对照。上述研究说明，CYP4F2转基因小鼠存在氧化应激，是小鼠发生高血压的关键，CYP4F2/20-HETE抑制IDH1/α-KG代谢途径。后续试验将继续完善α-KG受体GPR99等研究内容，揭示20-HETE相关性高血压的分子机制。此外，我们还发现雄激素诱导CYP4F2转基因小鼠肾脏的CYP4F表达，微粒体ω-羟化酶活性升高，20-HETE生成增多，血压进一步升高，CYP4F2/20-HETE影响转基因小鼠内源性花生四烯酸代谢酶的表达，20-HETE/EETs比例升高，文章发表于Gene（IF=2.196）鉴定了CYP4F2转基因小鼠“亚硝化应激”及iNOS表达上调，并鉴定20-HETE激活NF-kB信号通路，诱导iNOS表达，已经整理数据，准备投稿。项目资助下，发现雌激素对AHSG基因的转录激活作用，并鉴定了启动子区−1488/−1482 AP-1反应元件，并鉴定了MAPK介导的信号通路，文章发表于Osteoporosis International （IF=4.165）。项目资助下，整合临床基因诊断和产前诊断资料，鉴定数个遗传病的新突变或再发突变，已发表Medline收录论文2篇，修稿1篇。