补肾活血法对高糖/缺氧条件下视网膜Müller细胞与神经节细胞mGluRs调控作用及机制研究

DRP是世界性致盲的主要原因之一，探索其有效的防治措施是一项紧急课题。临床和实验均显示补肾活血法是治疗DRP的一种有效治法。最新资料显示，DRP发生过程中存在谷氨酸（Glu）兴奋性神经毒性损害，而代谢型谷氨酸受体（mGluRs）的表达异常在其中起着重要的作用，但至今未见中医药对DRP发生过程中视网膜Müller细胞和神经细胞的mGluRs表达有何影响的报道。故本课题拟采用体外细胞培养、生物化学和分子生物学等方法比较研究补肾活血中药含药血清对高糖、缺氧及高糖/缺氧状态下视网膜Müller细胞和RGCs的mGluRs表达有何干预作用及相关途径，以期从细胞和分子水平揭示补肾活血法防治DRP新的药物干预途径和可能的干预环节，诠释其治疗DRP新的作用机制，促进补肾活血法在治疗DRP方面的开发与应用。

糖尿病性视网膜病变（DR）是世界性致盲的主要原因之一，探索其有效的防治措施是一项紧急课题。最新资料显示，DR发生过程中存在谷氨酸（Glu）兴奋性神经毒性损害，而代谢型谷氨酸受体（mGluRs）的表达异常在其中起着重要的作用，但至今未见中医药对DR发生过程中视网膜Müller细胞和神经节细胞(RGCs)的mGluRs表达有何影响的报道。故本课题进行了补肾活血中药含药血清对高糖、糖基化终末产物(AGEs)、缺氧及AGEs/缺氧不同条件下视网膜Müller细胞和视网膜神经节细胞（RGCs）的mGluRs表达以及视网膜Müller细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）介导的缺氧信号通路有何干预作用及相关途径的研究，研究结果揭示：（1）AGEs比高糖，AGEs+缺氧比单纯缺氧更能诱导视网膜Müller细胞HIF-1α的高表达、且HIF-1α的表达强度与AGEs浓度有关。（2）在50mg.L-1的 AGEs及50mmol.L-1高糖条件下，视网膜Müller细胞HIF-lα表达上调主要与HIF-1αmRNA表达增强有关；在100 mg.L-1的AGEs条件下，其HIF-lα表达上调不仅与HIF-1αmRNA表达增强有关，还可能涉及到HIF-1α蛋白翻译后水平。（3）补肾活血中药复方含药血清能抑制高糖、AGEs、缺氧及AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞HIF-1α介导缺氧信号通路中HIF-1α、HIF-1αmRNA、血管内皮生长因子（VEGF）以及VEGFmRNA的高表达，降低脯氨酸羟化酶(PHD）2活性，提高PHD1活性，这可能是补肾活血法防治DR的一个重要药物干预途径。（4）在视网膜Müller细胞和RGCs混合培养模型中，高糖、AGEs、缺氧及AGEs/缺氧均能诱导第Ⅰ组mGluRs(mGluR1和mGluR5）高表达，但AGEs比高糖、AGEs/缺氧比单纯缺氧更能诱导mGluR5高表达，造成神经兴奋性毒性损伤。（5）补肾活血中药能提高在缺氧及缺氧/AGEs条件下第Ⅱ组mGluRs（mGluR2/3）和第Ⅲ组mGluRs(mGluR4和mGluR7)表达以抑制神经兴奋性毒性损害，能降低在AGEs条件下mGluR5表达以减少Glu的释放。这是从一个全新的角度诠释补肾活血法防治DR新的作用机制。为筛选该复方的药效物质基础，我们还对该复方进行血清化学研究。