Müller细胞在视网膜神经节细胞损伤中作用的实验研究

Müller细胞是视网膜中主要的胶质细胞，在维持神经组织内微环境稳定、神经细胞分化、神经细胞突触形成和突触浓度变化，以及与视网膜神经节细胞间信号传导等方面均具有重要作用。研究证实神经营养因子前体与P75NTR和Sortilin结合成三聚体后可以导致神经细胞凋亡的发生。视网膜神经节细胞凋亡是青光眼视神经损害的病理基础。视网膜神经节细胞上无P75NTR表达，但Müller细胞表面可同时表达P75NTR和Sortilin蛋白。基于前人和我们先期的实验基础，提出以下假说：神经营养因子前体与Müller细胞表面P75NTR及Sortilin结合是导致视网膜神经节细胞凋亡的可能机制。本课题将在细胞培养和动物实验两个层面，采用免疫组化、TUNEL染色等技术验证上述假说。本课题意义在于：如果上述假说成立，将为进一步了解青光眼视网膜神经节细胞凋亡的机制提供实验依据，也可为青光眼神经保护策略研究提供新的思路。

Müller细胞是视网膜中主要的胶质细胞，在维持神经组织内微环境稳定、神经细胞分化、神经细胞突触形成和突触浓度变化，以及与视网膜神经节细胞间信号传导等方面均具有重要作用。本研究目的是验证神经营养因子前体与Müller细胞表面P75NTR及Sortilin结合是导致视网膜神经节细胞凋亡的可能机制。本课题通过体外培养Müller细胞和视网膜神经节细胞系RGC-5，证实了Müller细胞只表达sortilin，RGC-5同时表达P75NTR和sortilin，使用可导致神经元细胞凋亡的神经营养因子前体ProNGF处理Müller细胞和RGC-5，均无凋亡发生，其中Müller细胞经过proNGF处理后，分泌TNF-α较对照组增加。本课题应用大鼠急性高眼压动物模型，玻璃体腔注射P75NTR抑制剂，按注射后1d，3d，5d取材，采用western blot、TUNEL染色等技术方法，发现急性高眼压可引起Müller细胞上proNGF表达增加，而阻断P75NTR后proNGF表达下降，并且凋亡RGC数目减少。根据以上结果我们得出结论：视网膜神经节细胞损伤可激活Müller细胞，引起proNGF表达增加，与Müller细胞上P75NTR结合，从而造成Müller细胞发生相应变化，继而启动RGC发生凋亡。