saRNAs上调Par-4基因表达的若干机制及其治疗前列腺癌的实验研究

前列腺癌是西方国家男性最常见的恶性肿瘤，我国的发病率也逐年递增，尤其是激素抵抗性前列腺癌，其有效治疗方法的探索极为重要。2006年小分子RNA 激活基因表达(RNAa)的作用被报道(PNAS,103:17337)。此后该发现者与本课题组合作，开展筛选靶向于前列腺癌抑癌基因启动子区的功能性saRNAs（小激活RNAs）的研究。在前期工作中，我们已筛选到若干能激活Par-4基因表达的saRNAs，经转染人前列腺癌细胞系PC3细胞能明显诱导Par-4基因的转录激活，并抑制肿瘤细胞的生长和活性。在此基础上，我们将采用染色质免疫共沉淀、RACE、基因芯片等检测技术，结合生物信息学知识和技术，深入分析saRNAs激活Par-4基因表达的序列特征和若干作用机制。同时，通过流式细胞术、动物实验等评估这些功能性saRNAs的前列腺癌治疗效果和前景。

前列腺癌是目前男性人群面对的最重要的公共卫生问题之一，基因靶向治疗为前列腺癌提供了新的治疗策略。本研究针对抑癌基因Par-4的启动子区设计小双链RNA，在前列腺癌细胞中成功转录激活该基因的表达，同时观察到小RNA诱导的Par-4基因激活能够部分抑制前列腺癌的生长。进一步研究显示小RNA诱导的Par-4基因激活伴随着基因启动子区特异性的表遗传学变化，序列位移研究揭示在启动子同一区域可以同时存在多对有功能的小激活RNA，这些小RNA均具备一些相同的特征。根据前列腺癌中小RNA激活Par-4基因的成功经验，研究再次针对抑癌基因INTS6基因的启动子区设计小激活RNA。在前列腺癌细胞转染特殊设计的小RNA后，INTS-6基因出现2~3倍的表达上调，并且呈现一定的时间和剂量特点。在小RNA诱导INTS-6表达的同时，前列腺癌细胞活力明显受到抑制，细胞周期停滞于G0/G1期，伴有细胞运动能力的下降。小RNA上调INTS-6基因表达后，Wnt通路的关键信号蛋白β-catenin在转录后水平表达下调，Wnt通路中的多种目标基因，如CCND1、MYC、MET和FRA-1等，在转录水平表达下调。上述这些研究提示，小RNA诱导的基因表达能够作为研究基因功能的工具，同时也为肿瘤的基因靶向治疗提供了全新的策略。