saRNA上调RUNX3表达应用于食管癌基因治疗及其机制研究

RUNX3是新近发现的一种抑癌基因，与肿瘤的发生、 发展关系密切，是肿瘤基因治疗的潜在靶点之一。本课题利用RNAa技术，在前期工作'saRNA上调食管癌细胞RUNX3 基因表达的体外研究'的基础上进一步开展四方面研究：①针对RUNX3启动子区非CpG岛区设计合成saRNA，筛选作用更强的saRNA；②体外实验，观察saRNA对食管癌细胞RUNX3在mRNA，蛋白水平表达增强作用，以及对食管癌细胞增殖、凋亡的影响；③体内实验，观察saRNA上调RUNX3基因表达对裸鼠食管癌移植瘤的影响，评价其体内抗肿瘤效果；④观察saRNA引起的食管癌细胞RUNX3基因表达升高与基因启动子区DNA甲基化、组蛋白修饰之间的关系，对其作用机制进行探讨。本研究旨在将 RNAa这项近两年新兴的基因激活技术应用于肿瘤基因治疗积累经验，为食管癌的基因治疗寻找一种新的方法及思路。

食管鳞癌(Esophageal squamous cell cancer， ESCC)，它是来自食道上皮细胞的原发性食管癌的其中一种类型，在世界范围内尤其是在中国有着很高发病率的一种恶性肿瘤｡ESCC的目前的治疗技术包括手术、放疗和化疗，尽管目前随着早期诊断和治疗方法上的进步，但ESCC却仍然是致死率很高的恶性肿瘤之一｡临床试验证实RUNX3阴性表达时肿瘤中淋巴道侵袭能力和淋巴结转移数目均明显增高，RUNX3阴性表达与食管鳞癌预后不良相关，可能是影响预后的重要因素，即RUNX3蛋白表达下调与食管鳞癌的临床TNM分期及淋巴结转移相关，参与食管癌变进展过程｡但是目前尚没有关于RUNX3对食管鳞癌细胞分子水平作用研究的相关报道。本研究通过应用免疫组织化学、western-blot免疫印迹、实时定量-聚合酶联反应的实验方法分别从蛋白和基因的不同角度研究了RUNX3在食管鳞癌组织中的表达以及对食管鳞癌细胞系生物学活性和肿瘤发生的相关性，并探讨了RUNX3与食管鳞癌各临床病理特征及预后之间的关系。旨在为探索食管癌的发生、发展机制，寻找特异的预后指标，为食管鳞癌的治疗确定新的治疗目标和提供基因治疗食道癌的理论基础｡目前为止，这是首次应用慢病毒构建RUNX3过表达载体并将其转染Eca109细胞的研究，并且RT-PCR和Western Blot方法从mRNA和蛋白质水平检测均表明获得了稳定过表达RUNX3的Eca109细胞株，实现了对Eca109细胞中RUNX3表达水平的调控，并在裸鼠体内造模成功，为今后研究RUNX3在食管癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了坚实理论的基础。RUNX3表达明显减少与ESCC患者临床分期有关。MMP-9和ICAM-1的表达在 RUNX3沉默后大大增加，协同参与食管鳞癌的发生、发展及恶变。我们还需要进一步的实验来确认RUNX3调节细胞生物学活性的信号通路以及它与ICAM-1、MMP-9的潜在联系。