Annexin I在NPC侵袭转移中的作用及其机制研究

我们前期的研究发现：鼻咽癌（NPC）和颈淋巴结转移NPC组织中存在高频率Annexin I表达下调/缺失，但其下调/缺失在NPC发生发展中的确切作用及其机制仍不清楚。为此，本项目拟选用Annexin I高表达的低转移NPC细胞系6-10B，运用siRNA技术降低其表达，分析降低Annexin I表达对6-10B侵袭转移能力的影响；另一方面，采用Annexin I低表达的高转移NPC细胞系5-8F，运用基因转染技术上调其表达，观察Annexin I高表达对5-8F侵袭转移能力的影响；然后采用质谱鸟枪法，选用串联亲和纯化等技术，高通量筛选与鉴定Annexin I与NPC转移相关的相互作用蛋白，绘制其在NPC转移过程中的调控蛋白质分子网络图谱，阐明其在NPC侵袭转移中的作用及其分子机制。项目研究结果不仅有助于揭示Annexin I与肿瘤的关系，而且为其可能应用于NPC诊断和治疗均提供科学依据。

本项目在我们已取得较好的研究工作基础上，选用Annexin I基因高表达的低转移NPC细胞系6-10B，运用小分子干扰RNA(siRNA)技术，建立了Annexin I表达下调/缺失的6-10B细胞系，采用Western blot、 流式细胞术、软琼脂集落及Transwell和划痕等细胞迁移侵袭能力实验,分析了降低Annexin I的表达对6-10B细胞系生物学行为（侵袭转移）的影响，结果显示，Annexin I表达下调能促进鼻咽癌细胞生长、促进其越过G0/G1期阻滞、增强其停泊非依赖性生长及迁移侵袭能力。. 同时我们采用Annexin I基因低表达的高转移NPC细胞系5-8F，将PDK-6-Annexin I真核表达载体导入5-8F细胞系，建立了Annexin I稳定高表达的5-8F细胞系，观察了Annexin I基因表达上调对5-8F细胞侵袭转移能力等生物学行为的影响，结果显示，Annexin A1表达上调能抑制鼻咽癌细胞生长、增强其G0/G1阻滞能力、减弱其停泊非依赖性生长能力、减弱其迁移侵袭能力。. 施用TAP技术及二维液相色谱与质谱结合技术，高通量筛选与鉴定了Annexin I与NPC转移相关的相互作用蛋白质，绘制了Annexin I在NPC转移过程中的调控蛋白质分子网络图谱，率先在国内外初步阐明Annexin I蛋白在鼻咽癌侵袭转移中的分子机制。