Annexin A3在肺腺癌转移中的作用及分子机制研究

Annexin A3为我们在前期研究中新发现的肺腺癌转移相关蛋白，经大量临床资料统计证实：Annexin A3表达与肺腺癌转移密切相关。然而，Annexin A3在肺腺癌转移中确切的生物学功能及机制尚未阐明。本项目基于前期研究结果，采用DNA克隆和RNAi 技术分别上调或下调肺腺癌细胞中Annexin A3的表达，系统分析Annexin A3表达水平改变对肺腺癌细胞生物学特性的影响，以明确Annexin A3在肺腺癌转移中的生物学功能。进一步以靶向蛋白质组学技术鉴定Annexin A3的相互作用蛋白，免疫共沉淀-Western blot等方法验证其与Annexin A3的相互作用关系。继以RNAi技术反向验证Annexin A3相互作用蛋白的功能，以筛选Annexin A3在肺腺癌转移中关键的相互作用蛋白，从而揭示Annexin A3在肺腺癌转移中的作用机理，为肺腺癌转移的防治提供新线索。

Annexin A3 为我们在前期研究中发现的一个新的肺腺癌转移相关蛋白（J Pathol, 2009, 217(1):54-64）。前期研究结果已阐明：Annexin A3表达与肺腺癌转移和预后密切相关。本项目拟在前期研究结果的基础上，进一步深入明确Annexin A3 在肺腺癌转移中的生物学功能以及揭示其作用的分子机制。本项目以肺腺癌A549细胞作为研究对象，首先采用RNAi技术下调A549细胞中的Annexin A3的表达，分析下调Annexin A3表达后A549细胞在体外及体内中生物学行为的改变情况。体外实验中，MTT assay及平板克隆形成实验检测发现下调Annexin A3表达可明显减慢A549细胞的生长；划痕实验检测发现下调Annexin A3表达可明显抑制A549细胞迁移；transwell实验检测发现下调Annexin A3表达可明显抑制A549细胞侵袭。体内实验中，下调Annexin A3表达可明显抑制A549细胞在体内的成瘤能力及转移能力。项目进一步对Annexin A3在肺腺癌中的作用机制进行了探索分析。采用Real-time PCR及Western blot技术分析下调Annexin A3表达对A549细胞中一些靶分子的表达改变情况。研究发现：下调Annexin A3表达可明显降低MMP-2和N-cadherin的mRNA和蛋白表达，但可提高E-cadherin的mRNA和蛋白表达。同时，项目对上述靶分子的蛋白表达情况在体内成瘤的瘤结节中也进行了免疫组化分析。同样，在体内形成的瘤结节中，上述靶分子也展现与体外相同的表达改变。并且，本项目还分析了下调Annexin A3表达对A549细胞中的信号通路影响。检测发现：下调Annexin A3表达可明显降低ERK1/2、MEK1/2、IκBα及Akt的磷酸化水平，而对P38的磷酸化水平却无明显影响。总而言之，本项目不仅明确了Annexin A3在肺腺癌中的生物学功能，也初步剖析了其在肺腺癌发生发展过程中的分子机制，为肺癌的防治及靶向治疗提供了新思路和理论基础。