微小RNA（miRNA）对实验性哮喘CD4+ T细胞增殖和分化的调节机制研究

过敏性哮喘是常见的气传致敏原引起的慢性疾病，目前尚无特异性治疗方法。粉尘螨Der f1变应原是最重要的气传变应原之一。螨性哮喘小鼠模型为哮喘发病机制及治疗研究提供了理想实验平台。CD4+T细胞亚群特别是Thl/Th2细胞失衡处于哮喘发病的中心环节，改善其增殖及分化可能是治疗过敏性哮喘的有效途径。微小RNA（miRNA）是调控T细胞增殖和分化的重要分子，其在哮喘CD4+T细胞中的意义还有待深入研究。预实验发现miR-135a等与哮喘CD4+T细胞调控相关，本课题拟通过芯片分析哮喘鼠脾CD4+T细胞的miRNA表达谱，T细胞功能实验验证miR-135a等T细胞调控相关miRNAs对哮喘鼠CD4+T细胞增殖和分化的影响，并通过差异mRNA表达及生物信息学方法，分析miR-135a等T细胞调控相关miRNAs的作用机制。以期为miRNAs在哮喘发病中的意义提供实验依据及为特异性治疗哮喘提供新思路。

项目背景.过敏性哮喘是常见的气传致敏原引起的慢性疾病，目前尚无特异性治疗方法。改善CD4+T 细胞增殖及分化可能是治疗过敏性哮喘的有效途径。微小RNA（miRNA）是调控T细胞增殖和分化的重要分子，其在哮喘CD4+T 细胞中的意义还有待深入研究。.主要内容.原核表达粉尘螨Ⅰ类变应原并进行大规模分离纯化，以此为致敏原致敏Balb/c小鼠。流式细胞术分选脾脏CD4+ T细胞，提取其总RNA，用microRNA（miRNA）芯片筛选差异表达的miRNAs，用长片段非编码RNA（LncRNA）芯片检测差异表达的LncRNA，同时分离其mRNA，并检测mRNA的表达谱。此外，分离纯化CD4+ T细胞的基因组DNA，用甲基化芯片对基因启动子的差异富集峰DEP分析、高CpG启动子的DEP分析、中CpG启动子的DEP分析、低CpG启动子的DEP分析、CpG岛的DEP分析、基因间的CpG岛的DEP分析、基因内的CpG岛的DEP分析、启动子CpG岛的DEP分析。.重要结果.miRNA芯片筛选结果表明：共获得16个差异表达的miRNAs，其中12个上调表达，4个下调表达。lncRNA和mRNAs表达谱的检测结果表明：共获得596个上调表达的lncRNAs，690个下调表达的lncRNAs；同时获得了800个上调表达的mRNAs，606个下调表达的mRNAs。甲基化芯片结果显示：结果表明：获得了1357个差异表达的基因启动子、837个差异表达的高CpG启动子、298个差异表达的中CpG启动子、220个差异表达的低CpG启动子、1380个差异表达的CpG岛、180个差异表达的基因间CpG岛、70个差异表达的基因内CpG岛以及1146个差异表达的启动子CpG岛。对上述结果进行比较分析后，最终获得了148个差异表达的基因启动子和157个差异表达的CpG岛。.结论.观察了粉尘螨Ⅰ类变应原致敏小鼠后脾脏CD4+ T细胞中的非编码RNA及其基因组甲基化的表达变化，为后续进一步研究差异表达的非编码RNA对CD4+ T细胞增殖与分化的调控具有重要的潜在应用前景。