微小RNA-9对视网膜干细胞增殖分化的影响及其作用机制的研究

microRNAs在干细胞的发育、增殖和分化过程中起重要的作用。microRNA-9（miR-9）通过对靶基因转录后的调控参与多种干细胞的自我更新和分化。本项目组前期工作发现miR-9和靶基因（细胞核受体TLX）与视网膜干细胞增殖和分化关系密切：在增殖的细胞中，miR-9的表达较低而TLX的量较高；在分化过程中，miR-9表达递增而TLX递减；抑制TLX的表达时，细胞的增殖能力明显受限。本研究拟通过原代视网膜干细胞，从细胞水平、分子水平和动物体内实验，探讨miR-9和TLX在视网膜干细胞的增殖、分化过程中表达水平的变化及关系，以及调节miR-9或（和）TLX的表达水平对视网膜干细胞增殖和分化的影响，并阐明miR-9、TLX在此过程中的相互作用关系。本研究以miR-9/TLX为切入点，探讨它们对视网膜干细胞增殖和分化的影响及其作用机制，为进一步探究视网膜干细胞的临床应用潜能提供新的思路。

microRNAs 在视网膜干细胞的发育、增殖和分化过程中起重要作用。microRNA-9(miR-9)通过对靶基因转录后的调控参与各种干细胞的自我更新和分化。本课题组前期发现，在体外增殖状态和分化状态下,新生小鼠的视网膜干细胞的miR-9表达存在显著差异。miR-9在视网膜干细胞的增殖过程中维持较低水平的表达，随着干细胞的早期分化，miR-9的表达水平呈递增趋势。在体外视网膜干细胞的增殖、分化过程中，miR-9的表达与细胞核受体TLX（miR-9 的靶基因之一）呈反向关系。同时，TLXsiRNA抑制TLX的表达后，干细胞的增殖能力受到限制的同时，能在一定程度上诱导视网膜干细胞向神经元细胞的分化。为此，通过体内外实验，本课题组发现上调miR-9表达抑制了TLX的表达从而抑制了视网膜干细胞的增殖，促进了视网膜干细胞向神经元细胞和神经胶质细胞的分化。然而，当对TLX进行过表达处理后，上调miR-9的表达对视网膜干细胞增殖和分化的这种作用会被抑制。同时，敲除miR-9在视网膜干细胞中的表达后，会增加TLX的表达，从而促进视网膜干细胞的增殖。此外，通过干扰小RNA对内源性TLX表达进行抑制，我们发现TLX的低表达会抑制视网膜干细胞的增殖而促进视网膜干细胞向视网膜神经元细胞和胶质细胞分化。与此同时，在过表达TLX的视网膜干细胞内同时上调miR-9的表达时，课题组发现过表达TLX的促进增殖和抑制分化的作用会因为miR-9的过表达而被抑制。因此，我们得出结论，miR-9和TLX形成了一种反馈调控通路来调节视网膜干细胞的增殖和分化。从而为解决视网膜干细胞的增殖和分化难题提供了实验依据和理论依据。.. 论文发表方面：在此项目的资助下,课题组已在《Stem Cells and Development》等SCI收录杂志发表论文7篇（均标注有本项目的资助编号，且本项目的负责人均为发表论文的通讯作者或共同通讯作者）,总影响因子(IF )27.398分。待发表1篇。.. 学术交流方面：我们多次参加全国眼科年会、全国眼科基础研究大会以及上海眼科相关的各种学术会议。.. 研究生培养方面：从事本项目研究的研究生共5名，已毕业3名。