氢交换质谱研究蛋白质与DNA药物复合物之间的相互作用

DNA结合蛋白与DNA之间的分子识别是一种非共价键弱相互作用。由于基于非共价键的蛋白质－DNA复合物在气相状态下不稳定，常规的质谱分析很难得到完整的复合物结构信息，因而，发展新的质谱分析技术非常必要。蛋白质和DNA的相互作用，通过改变作用位点及周边区域的微化学环境，影响主链上酰胺氢与溶液中氘的交换速率，为蛋白质及其复合物的构象研究提供了一系列离散的传感器。本项目拟整合稳定同位素标记、蛋白质快速酶解、多肽低温超快速分离和高分辨MS/MS分析，建立氢氘交换质谱分析方法，通过测定蛋白质与DNA结合前后，主链酰胺氢与氘交换速率的变化，确定蛋白质和DNA相互作用的位点。为下一步研究DNA-金属抗癌药物复合物与蛋白质的非共价键相互作用、探索DNA结合蛋白在细胞药物应答中的功能和作用提供方法学基础和平台。