多靶点抑制X区、PreS1和NTCP基因后对HBV感染和清除的影响

Antiviral therapy is the first choice for chronic hepatitis B virus (CHB). Antiviral drugs could not eradicate HBV and it is impossible for complete cure. The key point for curing CHB is eradicate covalently closed circular DNA（cccDNA）in nucleus. HBV X gene enhance HBV replication by trans-activation. N terminal amino acid of PreS1 could combine with specific receptor Sodium taurocholate co-transporting polypeptide (NTCP) on hepatocyte, which is the key point of HBV entry host cell. We observed CRISPR/Cas system targeting X region which could bring effect in reducing cccDNA in nucleus, inhibiting HBV replication, and decreasing HBsAg and HBeAg. We will research CRISPR/Cas system editing all 69 targets on PreS1 region, X region and NTCP genome, observe whether the inhibition of HBV cellular entry or degradation nuclear cccDNA markedly on one or/and three target, and provide new direction for antiviral therapy.

抗病毒治疗是慢性乙型肝炎（CHB）治疗的首选，但对大多数CHB患者而言，抗病毒药物不可能清除HBV，因此CHB根治成为奢望。而清除宿主细胞核内HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）是治愈CHB关键。HBV X基因有反式激活作用，可促进HBV复制。PreS1 N端氨基酸与肝细胞表面钠离子--牛磺胆酸共转运蛋白（NTCP）受体特异性结合，是HBV进入细胞的关键。我们发现CRISPR/Cas系统靶向X区，有降低细胞核内cccDNA、抑制HBV复制及HBsAg和HBeAg表达的作用。我们的研究将涵盖PreS1区、X区和NTCP基因的69个靶点，观察CRISPR/Cas系统联合切割S区、X区和NTCP基因的单一或多个靶点后，能否最大程度的减少HBV进入细胞以及降解细胞核内cccDNA，为抗病毒治疗提供新思路。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是世界公共卫生的主要问题，抗病毒治疗可以是临床医生的治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者的首选方案，但口服抗病毒药物不能被完全清除体内的HBV。HBV的基因组 cccDNA的X基因反式激活作用促进病毒的复制；PreS1 N端氨基酸与人肝细胞表面特异性受体钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白（NTCP）结合，与HBV进入宿主细胞有关。我们前期研究发现CRISPR/Cas系统作用于X区部分靶点后对HBV病毒复制和cccDNA、HBsAg、HBeAg均有不同程度的影响。我们利用CRISPR/Cas9系统将S区和X区31个靶点均将纳入研究，结果发现靶点X2和S6对HbsAg和HbeAg有明显下调作用；C1、P1和V7对HbeAg有明显下调作用；S12对HBV DNA 合成有抑制作用；SP3、SP4、S10、S14、V7和X2 对HBV基因组S区、X区和C区有明显下调作用，其中SP3、SP4、S10、S14和X2 五个靶点由于V7靶点；SP3，SP4和V7靶点对HBV表达相关蛋白有下调作用，为抗病毒提供新思路及方向。