间充质干细胞对异基因T细胞体内趋化影响机制的研究

趋化因子及其受体介导的T细胞向靶器官定向迁移是GVHD发生的关键环节。间充质干细胞(MSC)对GVHD防治机制是否与影响T细胞趋化尚不明确。我们初步体外研究发现，MSC下调活化T细胞趋化因子受体CXCR3、CCR5的表达，并上调淋巴结归巢受体CCR7的表达，同时影响相应趋化因子的表达,从而改变T细胞趋化活性。本研究拟通过骨髓移植动物模型，在体内阐明骨髓来源MSC对预处理所致组织炎症因子和趋化因子产生的影响，GVHD靶器官产生趋化因子和对供者T细胞表达与GVHD相关趋化因子及受体的影响，以及MSC对GVHD靶器官和淋巴器官募集T细胞的影响，以证明MSC可能通过这些机制预防GVHD的发生和发展。同时建立GVHD动物模型，观察MSC应用对GVHD靶器官趋化因子及受体表达的影响，T细胞亚群的改变以及淋巴细胞是否发生重新分布，以阐明MSC通过影响T细胞体内迁移而发挥对GVHD的治疗作用。

供者来源的异基因T细胞向靶器官或组织定向迁移在移植物抗宿主病（GVHD）的发生中起着关键作用，而这种定向迁移过程则主要受趋化因子与其受体之间的相互作用所调控。我们前期的研究证实，骨髓来源的间充质干细胞(MSC) 能够改变活化T 细胞表面趋化因子受体表达谱并抑制其迁移能力。本课题在此基础上，成功建立了采用胶原酶消化的骨密质碎片法在体外分离和扩增小鼠密质骨来源MSC的培养体系，这一方法与传统全骨髓贴壁法相比，操作简便，分离效率高，对细胞活性影响小。本课题通过构建致死剂量全身照射（TBI）后小鼠放疗损伤模型和allo-HSCT后小鼠特发性肺炎综合症（IPS）模型，证明骨密质来源MSC移植能够改变T细胞表面趋化因子受体的表达，并抑制T淋巴细胞在受者鼠体内的活化、迁移，从而对TBI小鼠的造血毒性和IPS小鼠所致肺损伤提供保护作用。进一步研究揭示MSC预防或治疗IPS的作用可能与以下机制有关：1，抑制肺组织释放炎性细胞因子和Th1型趋化因子，不仅阻碍了炎症反应的放大；而且降低了肺/血循环之间趋化因子的浓度梯度，从而减少T细胞向肺脏募集；2，上调了外周血和肺泡灌洗液中的调节性T细胞的比例，诱导肺组织对同种异体抗原的免疫耐受；3，通过调控T细胞表面趋化因子受体的表达谱（下调CXCR3和CCR5的表达，上调CCR7的表达），从而改变了供者来源的异基因T细胞在受者鼠体内的迁移能力，一方面减少了其迁移到肺部，另一方面促进它们向次级淋巴组织归巢；4，抑制Th1型反应，促进Th1/Th2平衡向抗炎的Th2极倾斜。在临床研究中，我们发现应用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对健康供者进行动员，能够改变供者T淋巴细胞趋化因子受体的表达，并进一步抑制其在受者体内的迁移能力，从而减少急性GVHD的发生；我们也观察到allo-HSCT后受者T细胞表面趋化因子受体的表达水平与其急性GVHD的发生率密切相关，发现CCR5表达增高或CCR7表达降低可作为急性GVHD早期诊断及鉴别诊断的有力指标，该研究亦为针对趋化因子受体的靶向防治GVHD提供了新的分子目标。此外，我们在国内外率先证实，蛋白酶体抑制剂（万珂）能够改变活化后T细胞表面趋化因子受体的表达，从而影响其趋化能力，证实万珂有可能成为治疗或预防GVHD新的手段。