常用免疫抑制剂对调节性B细胞的作用及由此发挥负向调节的机制研究

Allograft rejection is one of the major risk factors for organ transplant recipients. Tolerance induction is the best way to avoid it. Regulatory immune cells maybe the bridge to tolerance. In recent years, people have made gratifying achievements in the research of regulatory T cell (Treg). But we know a little about regulatory B cells (Breg), another member of regulatory immune cells network. At present, immunosuppressive agent is the most effective way to maintain non-response of recipient to donor. But the effect of immunosuppressive agents to Breg is still unknown. We have found that Sirolimus had proliferation effect on Breg by pilot experiment, and Breg can enhance the amplification of Treg by producing cytokines IL-10 and TGF-β. Nowadays, there is no report about the effect of other immunosuppressive agents on Breg, and it is unclear about the effect of Treg on Breg. This study attempts to explore the effect of common immunosuppressive agents on Breg and the detailed interaction between Breg and Treg, which is helpful to selecting immunosuppressive agents individually in clinic.

排斥反应是器官移植受者面临的主要风险之一，诱导免疫耐受是避免排斥反应最佳方式，而调节性免疫细胞网络可能是通往免疫耐受的桥梁。近些年，针对调节性T细胞（Treg）的研究取得了可喜的成果，而人们对调节性免疫细胞网络另一成员——调节性B细胞（Breg）的认识才刚刚开始。免疫抑制剂是目前维持器官移植受者对移植物免疫不应答状态的最佳手段，其对Breg细胞的作用尚缺乏报道。我们前期的研究发现，西罗莫司对Breg细胞有增殖作用，Breg细胞可能通过分泌细胞因子IL-10、TGF-β促进Treg细胞的增殖，从而发挥负向调节功能。目前，尚未见其它免疫抑制剂对Breg细胞作用的报道，另外，Treg细胞反过来是否对Breg细胞有相应的增殖作用亦不清楚。本课题准备探索其他临床常用免疫抑制剂对Breg细胞是否存在增殖作用，同时明确Treg细胞是否对Breg细胞有增殖作用。从而为个体化选择临床免疫抑制剂提供理论依据。

Breg细胞是一群具有负向调节功能的B淋巴细胞。目前的研究认为，Breg细胞主要通过产生IL-10、TGF-β1以及自然抗体等发挥负向调节作用。具有诱导器官移植术后免疫耐受和维持耐受状态的作用。临床常用的免疫抑制剂作用机制不同，其对Breg细胞的作用尚缺乏详细研究。本课题通过临床药物转换患者外周血检测、细胞培养、动物实验三方面研究，探索西罗莫司和他克莫司对Breg细胞的增殖作用，并进一步研究Breg细胞与Treg细胞间存在的关系。临床试验显示，将肝移植术后患者的他克莫司部分转换为西罗莫司后1个月，患者外周血中Breg细胞和Treg细胞占淋巴细胞比值均明显增加，IL-10+Breg细胞和TGF-β1+Breg细胞占B细胞比值、细胞因子IL-10和TGF-β1水平也明显高于转换前。对照组患者外周血上述淋巴细胞亚群和细胞因子无明显变化。纳入研究6个月内，药物转换组患者胆道并发症发生率明显低于对照组。细胞培养实验显示，经由10ng/ml西罗莫司刺激72小时后，Breg细胞占B细胞的比值和Treg细胞占淋巴细胞的比值升高，他克莫司对Breg细胞和Treg细胞占比无明显影响，在西罗莫司刺激的细胞培养基中加入IL-10抗体或TGF-β1抗体后，Breg细胞仍有扩增，但扩增效果减弱，同时加入上述两种抗体后，西罗莫司对Breg细胞的扩增作用消失。无论IL-10和TGF-β1被分别中和还是联合中和后，西罗莫司对Treg细胞的扩增效应均消失。动物实验显示，给小鼠喂食2mg/kg•d西罗莫司2周后，小鼠外周血Breg细胞占B细胞的比值及Treg细胞占淋巴细胞的比值均有升高，细胞因子IL-10和TGF-β1也高于对照组。喂食他克莫司2周后，上述淋巴细胞亚群和细胞因子均无明显变化。上述结果明确了西罗莫司具有增殖Breg细胞和Treg细胞的功能，Breg细胞可能进一步通过分泌细胞因子IL-10和TGF-β1促进Treg细胞的增殖，而起到抗排异及诱导免疫耐受的作用。他克莫司无明显增殖Breg细胞和Treg细胞的作用。