AML1-ETO与PRAME在急性髓性白血病发生中的协同作用研究

约40％急性髓性白血病M2型患者具有AML1-ETO 融合基因，而AML1-ETO融合蛋白只有与其他异常协同作用才能致白血病。我们已在国际上报道：AML1-ETO（+）M2患者PRAME mRNA水平普遍异常增高，中位值高于AML1-ETO（-）M2患者710倍。而AML1-ETO与PRAME之间调控关系的研究国际上未见任何报道。我们就此提出假说：AML1-ETO融合蛋白上调PRAME的表达，PRAME促进AML1-ETO（+）细胞生长、抑制分化及凋亡，AML1-ETO融合蛋白与异常高表达的PRAME协同作用引发白血病。我们拟在AML1-ETO（+）细胞株及M2患者原代白血病细胞两个层面上研究AML1-ETO与PRAME之间的相互关系、协同作用和调节机制。本研究不仅有助于阐明AML1-ETO（+）急性髓性白血病发病机制，而且为AML1-ETO和PRAME双靶点联合治疗提供理论依据及新思路。

白血病细胞存在多种分子异常。我们前期工作发现，与其它类型的急性髓性白血病(AML)相比，AML1-ETO(+)AML普遍异常高表达PRAME。为研究它们之间的关系，本课题做了以下工作：1）将AML1-ETO基因转染KG-1a或调控A/E-U937细胞导致AML1-ETO表达或升高的同时PRAME明显升高。通过SiRNA抑制SKNO细胞株AML1-ETO的表达，PRAME表达无明显变化。说明AML1-ETO直接调控PRAME升高，但是这种调控可能不可逆。2）通过检测AML1-ETO(+)AML患者骨髓Ki-67抗原、8色髓系分化相关抗原及PI/Annexin V双染色发现PRAME表达水平与其增殖、分化及凋亡程度不相关。3）亚硫酸氢钠测序法证明PRAME基因启动子3’端及外显子1b区+132-+363位点CpG位点甲基化程度与其mRNA水平总体负相关，但存在明显个体差异，说明甲基化之外其他机制参与调控PRAME的表达。4）PRAME高表达与低表达的两组AML1-ETO(+)AML患者基因表达谱明显不同，明显上调及下调表达的基因分别为184和143个，它们分别参与了细胞的增殖、分化及凋亡过程。本课题进行的其他相关分子异常的研究包括：1）c-KIT突变是AML1-ETO(+)AML常见的分子异常，发生率达36.5%，成人AML1-ETO(+)AML中c-KIT突变是复发和生存的独立不良预后因素。2）WT1与PRAME类似，均为泛白血病分子标志，在AML1-ETO(+)AML中亦普遍过表达，初诊AML1-ETO(+)AML中WT1低表达是复发和生存的独立不良预后因素。3）PRAME在骨髓增生异常综合征患者中普遍高表达并且有更高程度增加的患者比例明显多于WT1，PRAME联合WT1是监测其微小残留病的好的分子组合。4）硼替佐米能够明显降低PRAME表达水平增高的多发性骨髓瘤患者的复发而不影响PRAME表达水平正常患者的疗效。5）CBFB-MYH11(+)AML与AML1-ETO(+)AML密切相关，同属于CBF-AML，治疗随访期间分子异常CBFB-MYH11mRNA水平可以分层患者，异基因造血干细胞移植明显改善分子反应差患者疗效。本课题有关PRAME及其它相关分子异常的研究有助于我们探索AML等血液恶性肿瘤发病机制、寻找预后指标及治疗靶点，从而推进个体化治疗以提高疗效。