内蒙古地区绵羊常见胃肠道线虫耐伊维菌素药物研究

With a high rate of infection and wide distribution, the sheep gastrointestinal nematodes were the main parasites which influencing the growth and health of sheep. At present, the traditional controlling methods are still used chemicals. But because of the abuse of vermifuge, some routine gastrointestinal nematodes have got a resistance to antihelmintics, and these seriously affected the usability. Ivermectin is a typical representative. According to the research reports, some nematodes of livestock have obtained a resistance to ivermectin in some places of China. Based on the works we had done before, through the investigation of current situation of the main gastrointestinal nematodes resistance to ivermectin in sheep, we will find out the resistant strains to ivermectin and their distributions, analyze the epidemical range and the scale of harmfulness. The relationship between the resistance genes to ivermectin and the gastrointestinal nematodes would be studied, and new resistance gene would be found. The results will explore the reasons and the evolutionary process of ivermectin-resistance of livestock gastrointestinal nematodes on the molecular level in China. The research will provide the information resources and the experimental data for database of the parasite species of ivermectin-resistance and biological information of the resistance gene. Also, we will understand some mechanism of ivermectin-resistance and provide a new idea for slowing down the development of ivermectin-resistance. So the research results will have a very significant theory value and have an extensive application prospect.

绵羊胃肠道线虫分布广，感染率高，是影响羊只健康生长的主要寄生虫种类。目前，传统的防治仍是利用化学药物驱虫，但多年来某些驱虫药的滥用，已导致不少寄生虫产生耐药性，严重影响驱虫效果。其中，伊维菌素就是典型代表。据调查我国不少地区家畜线虫已经对伊维菌素产生了耐药性。本项目拟在前期工作基础上，开展内蒙古地区绵羊常见胃肠道线虫耐伊维菌素药物现状的调查，查明耐药性虫株种类和分布，了解其流行范围和危害程度。从已知耐药性相关基因入手，系统性地了解它们与胃肠道线虫耐伊维菌素的确切关系，并力求发现一些新的耐药基因，从驱虫实践及分子水平上探索我国家畜线虫耐伊维菌素药物的发生根源、演变过程及变化规律。为我国耐药虫株库及耐药生物信息数据库的建立，提供信息资源和实验数据，以填补国内空白。并为基本阐明伊维菌素耐药性机理，防止耐药性的产生和发展，提供新思路。研究成果必定具有非常重要的现实意义和广阔的应用前景。

绵羊胃肠道线虫是影响羊只健康生长的主要寄生虫种类。但多年来驱虫药的滥用，已导致不少寄生虫产生耐药性，严重影响了驱虫效果。其中，伊维菌素驱虫药就是典型的代表。本研究在了解内蒙古地区绵羊主要常见胃肠道线虫-捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)和细颈部线虫(Nematodirus)流行现状的基础上，利用粪便虫卵减少试验(FECRT)查明了这些线虫耐药性虫株的分布。数据显示，在被调查地区，85.7%的羊群对伊维菌素（Ivermectin）耐药， 75%的羊群对阿苯达唑（Albendazole）耐药,还有的是双重耐药。对这些耐药性虫株进行了分离，共获得5个捻转血矛线虫耐伊维菌素虫株和1个敏感虫株及1个耐细颈线虫虫株，对其进行了耐药性检测及比较。随后，对不同捻转血矛线虫分离株和细颈线虫(Nematodirus oiratianus)分离株耐伊维菌素相关基因的表达进行了分析，如多种糖蛋白基因（Pgp）及谷氨酸门控氯离子通道（GluCl）基因等，系统地了解了它们与线虫耐药性的关系。其中9个GluCl基因的表达量同时受性别和耐药性的综合性影响，这种现象国内外以前未见报道。为了弄清耐药性分子发生机制，对伊维菌素作用前后的捻转血矛线虫分离株，分别进行了比较转录组学和蛋白组学研究，从中得到了一些捻转血矛线虫新的耐伊维菌素药物基因，进而利用RNA干扰技术（RNAi），对GST、UGT、Hsp70、TRINITY_DN30265_c0_g1_i5_1和Pgp-9五个耐药性基因进行了基因沉默。荧光大肠杆菌饲喂抑制试验显示，在伊维菌素作用下，其中GST、UGT 、Pgp-9三个基因沉默后的捻转血矛线虫耐药分离株幼虫的运动性和摄食能力受到显著性抑制，说明这些基因与捻转血矛线虫耐伊维菌素相关，其中前二个基因是新发现的耐药性基因。研究成果具有非常重要的理论和现实意义，为了解伊维菌素耐药性机理，防止耐药性的产生和发展，提供了新的思路。对常用驱虫药的耐药性检测具有重要的参考价值。