捕食线虫性真菌捕杀家畜寄生性线虫基本生化作用机制的研究

寄生性线虫种类多、分布广，是我国北方草原地区严重危害畜牧业发展的家畜疫病，传统的防治方法一般是利用化学药物进行驱虫，但长期使用除造成虫体耐药性和环境污染外，最大的问题是导致动物源性食品中药物残留，由此所导致的食品安全问题不仅对消费者健康构成了严重的威胁，而且成为发达国家限制我国动物源性食品进入国际市场的"绿色贸易壁垒"。解决这一问题的最佳源头控制方法是研究开发生物天敌及其产品，对家畜寄生性线虫病进行生物控制。本项目拟在前期研究工作的基础上，从生物化学因素角度出发，分离捕食性真菌捕杀虫体过程中所产生的凝集素和主要的蛋白酶，研究其生物化学性质和杀虫活性；对家畜寄生性线虫的天敌-捕食性真菌黏附、穿透、消化虫体的基本生化作用机制进行深入地研究，从而为更好地在生产实际中利用捕食性真菌这类生物天敌资源提供科学依据。

家畜线虫病种类多、分布广，是严重危害畜牧业发展的家畜疫病，传统的防治方法一般是利用化学药物进行驱虫，但长期使用除造成虫体耐药性和环境污染外，最大的问题是导致动物源性食品中药物残留，由此所导致的食品安全问题不仅对消费者健康构成了严重的威胁，而且成为发达国家限制我国动物源性食品进入国际市场的"绿色贸易壁垒"。解决这一问题的最佳源头控制方法之一是研究开发生物天敌及其产品，对家畜线虫病进行生物控制。本项目在前期研究工作基础上，从生物化学因素角度出发，分离捕食性真菌捕杀虫体过程中所产生的凝集素和主要的蛋白酶，研究其生物化学性质和杀虫活性；对家畜寄生性线虫的天敌-捕食性真菌黏附、穿透、消化虫体的基本生化作用机制进行研究，从而为更好地在生产实际中利用捕食性真菌这类生物天敌资源提供科学依据。通过三年潜心研究，取得了如下研究成果：明确了捕食性真菌捕食器菌丝表面聚合物中的大分子量蛋白质同普通营养菌丝提取的大分子量蛋白质相比，其含量较高且成分复杂，有的蛋白质为捕食器菌丝所特有，而且表面聚合物中检测到了磷酸酶活性。了解到真菌培养基及诱导物的种类明显会影响捕食性真菌发酵液中胞外蛋白质的种类、含量及活性；其中马圆线虫诱导的枸椽酸培养基蛋白酶产量和活性最高，磷酸酶可能在捕食性真菌侵染线虫过程中与蛋白酶共同起作用。可以采用硫酸铵盐析沉淀法粗提捕食性真菌胞外蛋白酶。从捕食性真菌枸椽酸液体培养基发酵液中纯化到了三种胞外蛋白质，经检测都具有蛋白酶活性，维持其生物活性所需的pH和温度范围都比较大。在捕食性真菌发酵液中存在着具有杀线虫作用的活性物质，且加动物线虫诱导的发酵液杀线虫作用明显高于对照组，差异显著，并且发酵液对蝇蛆也具有一定的杀灭作用。通过对丝氨酸蛋白酶基因同源性分析，认为捕食性真菌-少孢节丛孢菌在不同国家或地区间有株的差异。在捕食性真菌捕食动态观察过程中，发现Duddingtonia flagrans有自发产生菌环现象，而且D.flagrans菌与少孢节丛孢菌（A.olispora）相比，产生菌环和菌网的时间都比较早，这从发育方面证实了捕食性真菌-D.flagrans在临床应用方面的价值和发展潜力。初步建立了捕食性真菌冻干生物制剂制备方法，取得了较好的杀虫研究效果。