中医魄不安于肺所致不寐大鼠模型睡眠相关因子研究

The classification standard not unified may be one of the reasons to the contradiction between the Traditional Chinese Medicine (TCR)’s high curative effect and low repeatability. After a pilot study, our team finds a convenient and easy, objective and practical classification method, which can best reflects the Viscera-state Theory, we call it the ‘WuShen’ Classification. In order to further study the material basis of the ‘WuShen’ Classification, we deprive the rats’ REM sleep and save the NREM sleep to build the model, and settle the model rat electroencephalogram changes of NREM sleep phase existing and REM sleep phase lacking as the evaluation index. Besides that, in order to make clear the material basis of the inferior spirit and its unsettling in lung, we plan to find the content differences of 5-HT, DA, IL-1β,IL-6, TNF-α, MT, VIP in model rat’s serum, brain and internal organs at different time so as to reveal the material basis of the inferior spirit and its unsettling in lung.

中医不寐辨证分型标准不统一可能是中医不寐治疗疗效高但可重复性低的原因之一，本课题组经前期研究，发现不寐具有一个既符合中医藏象理论、又方便易行、客观实用的分型方法，我们称之中医不寐五神分型。为进一步探寻中医不寐五神分型的物质基础，本课题根据中医不寐五神分型依据不寐单一主症分型原理，设计建立剥夺大鼠REM睡眠、保留大鼠NREM睡眠的魄不安于肺不寐大鼠模型；并以大鼠脑电显示以NREM睡眠时相为主而缺乏REM睡眠时相特征为中医魄不安于肺不寐大鼠模型的评价指标；同时以探寻魄不安于肺不寐部分物质基础为目的，通过研究模型鼠肺、心、脑等相关组织中5-HT、DA、IL-1β、IL-6、TNF-α、MT、VIP七种睡眠相关因子在魄不安肺不寐大鼠模型与其他对照组间不同时点、不同组织间的差异、变化，探寻以上七种睡眠相关因子在魄不安肺不寐大鼠及各主要相关脏器之间的部分分布特点，以期发现魄不安于肺不寐的部分物质基础。

本课题根据中医不寐五神分型依据不寐单一主症分型原理，设计魄不安于肺不寐大鼠模型，通过研究模型鼠血清、肺、心、脑等相关组织中5-HT、DA、IL-1β、IL-6、TNF-α、MT、VIP七种睡眠相关因子在模型组与其他对照组间的分布差异，发现了魄不安于肺不寐的部分物质基础。动物造模研究发现：小平台水环境法对大鼠REM睡眠时相的剥夺效果，优于大平台水环境法，可以作为中医“魄不安于肺”不寐动物实验研究的造模方法；“持续的、稳定的出现以低幅高频信号θ波为主的皮层EEG特征性变化”可以作为造模成功的评价指标。动物实验研究发现：①除IL-1β以外，血清DA、5-HT、IL-6、MT、TNF-α、VIP含量的检测，与其他对照组相比，差异显著，可以作为评价中医“魄不安于肺”不寐动物模型外周血的敏感指标。②病理研究发现肺泡壁毛细血管轻微扩张充血、纤维结缔组织增生致使肺泡壁增厚、肺泡腔可见巨噬细胞，可以作为评价中医“魄不安于肺”不寐动物模型的组织病理阳性表现。③免疫组化检测显示小平台水环境法睡眠剥夺对实验大鼠脑、肝、心、肺、肾、大肠组织中的IL-1β具有较为明显的影响，表达量随干预时间延长而增加，IL-6在肺、大肠中表达阳性，时间趋势不明显；TNF-α在脑、肝、心、肺、肾、大肠中均有表达，时间趋势不明显；MT在大鼠脑、肺中表达明显，在肝、心、脾、肾、大肠中未见明显表达；VIP在大鼠脑、脾、大肠中均有表达，在肝、心、肺、肾中未见明显表达。.总之，实验研究揭示了5-HT、DA、IL-1β、IL-6、TNF-α、MT、VIP七种睡眠因子在中医“魄不安于肺”不寐大鼠模型外周血清及主要相关脏器中的部分生理病理关系，发现了中医不寐五神分型法研究的肺不藏魄不寐证型的部分物质基础，为进一步开展不寐研究打下了基础，对下一步开展中医神志研究开拓了新的研究思路。