基于"以方测证"理论的心衰大鼠模型中医证型研究

Animal heart failure model can mimic the process and characteristics of human heart failure. At present, several mature animal models of heart failure had been established by different methods.There exists different types of TCM syndrome among patients of heart failure, and so does the animal models. We guess that this distiction may be due to the methods of establishing model.In this study, we try to infer whether it is yang deficiency or dual-deficiency of qi and yin according to "symdrome detection by formula" method by administering Shen-Fu injection and Shen-Mai injection on four advanced rat models of heart failure and using survial rate as outcomes.Then, blood flow dynamics and myocardial tissue morphology were observed and recorded. Meanwhile, serum angiotensin Ⅱ, endothelin-1, norepinephrine and NT-proBNP are tested by ELISA, and the expressions of protein and mRNA of AT1 receptor, endothelin-1 and β1 adrenergic receptor in myocardial tissue are detected by western blot and RT-PCR.Through the study, we are aimed to explore whether animal models of heart failure exist discrepancies of sydrome, whether the differences of syndromes are related with the methods of animal models, and whether some specific indicators are concerned with TCM syndromes, find essence of syndrome in heart failure and provide evidence for rational use of TCM medications.

心衰动物模型可以模拟人类心衰的过程和特征，目前已应用多种方法建立了几种较成熟的心衰动物模型。人类心衰存在不同的中医证型，心衰动物模型也应有证型的差异，我们推测这种差异可能与造模方法有关。本研究采用成熟的造模方法建立4种晚期心衰大鼠模型，以参附注射液和参麦注射液为药物，应用"以方测证"法，以每种模型的生存率为统计指标，推测4种动物模型是否为阳虚证或气阴两虚证；然后检测动物的血流动力学指标，观察心肌组织形态学情况，ELISA法检测血清血管紧张素Ⅱ、内皮素-1、去甲肾上腺素和NT-proBNP水平， Western Blot和RT-PCR法分别检测大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ受体1、内皮素-1、β1肾上腺素能受体蛋白和mRNA的表达水平。通过本研究初步探讨不同心衰动物模型是否存在证型差异，是否存在微观指标与中医证型相关，探寻心衰中医证候本质特征，为临床中药制剂合理应用提供实验依据。

心衰动物模型可以模拟人类心衰过程和特征，人类心衰存在不同的中医证型，心衰动物模型也应有证型的差异，我们推测这种差异可能与造模方法有关。本课题基于“以方测证”法，运用经典的造模方法成功建立3种晚期心衰大鼠模型：心肌病心衰大鼠模型、心肌梗死心衰大鼠模型、高血压心衰大鼠模型，通过参附注射液和参麦注射液干预，以每种模型的生存率为统计指标，并根据多项心、肾功能微观指标、心肌组织形态学，结合行为体征等对比分析，探寻心衰中医证候本质特征，初步推测出3种经典心衰大鼠模型的中医证型及其证候的生物学基础，其中阿霉素诱导的心肌病心衰大鼠模型属于心阳虚证，冠脉结扎诱导心肌梗死心衰大鼠模型属于瘀阻心脉证，Dahl盐敏感性高血压心力衰竭大鼠模型属于心气阴虚证。并发现NT-proBNP、TN-α、AngII、EF值等微观指标能较好反映心衰发展的进程，其中血清NT-proBNP、TN-α指标能够反应心功能水平及心衰程度，与心阳虚证动物模型的相关性较大；NT-ProBNP与EF值能够反映血流动力学状况，与瘀阻心脉证动物模型的相关性较大；血清NT-proBNP和AngII指标能够反映大鼠心肌组织形态的改变，与气阴两虚证动物模型的相关性较大。4年来，课题组发表学术期刊论文25篇、硕士学位毕业论文4篇、会议交流论文18篇；获得省部级科技成果奖励三等奖2项：其中“基于微观辨证的冠心病血瘀证生物信息特征研究”获湖南省自然科学成果三等奖，“基于微观辨证的冠心病血瘀证敏感指标筛选及病理机制研究”获中国中西医结合学会科技成果奖三等奖；获国家实用新型专利3项；参加各类国际国内学术会议30多人次，18篇论文在大会交流；培养硕士生5名，博士生1名；2017年成功立项国家自然科学基金面上项目课题“基于TGF-β/Smad通路探讨高血压心衰证候本质及心肾纤维化机制”。