荔枝多酚氧化酶基因的克隆及表达

通过改良的SDS法获得了高质量的荔枝幼果RNA，并构建了高质量的cDNA文库，分析了已发表的植物多酚氧化酶基因结构。发现植物多酚氧化酶基因具有两个保守区，根据此特点设计一对简并引物，通过PCR的方法扩增荔枝多酚氧化酶基因两个保守区之间的cDNA片段。将此cDNA片段用地高辛标记制备探针，从荔枝细幼果的cDNA文库中筛选编码荔枝多酚氧化酶的全长cDNA，获得5个阳性克隆，测序结果表明编码荔枝多酚氧化酶的cDNA全长为1998bp，编码584个氨基酸。该cDNA在大肠杆菌中表达大约60KD的蛋白质，此外将cDNA反向插入到pBI121植物表达载体，获得了荔枝多酚氧化酶基因的反义RNA植物表达载体，正准确转化荔枝，以期获得抗褐变的荔枝新品系。