茶树多酚氧化酶基因的克隆及其反义基因的转化

本研究根据已发表的木本植物多酚氧化酶基因的保守序列，设计兼并引物，用RT-PCR法克隆了茶树的多酚 氧化酶基因，对茶树农杆菌转化系统进行了优化。LB4404为较为适宜的转化菌株。潮霉素比卡那霉素在筛选效果上更加适合茶树，它能有效地使未转化组织褐化死亡。银离子对茶树的 转化效率无促进作用。用高效液相色谱法测定结果表明，在正义和反义的转化茶树愈伤组织中，虽然多酚氧化酶活性有所不同，但尚未发现多酚含量有显著的差异，此项工作尚待继续深入进行研究。此外茶松多酚氧化酶还参与茶树对逆镜（温度、机械伤害）胁迫的反应，表现在其同工酶的酶谱变化，但在转录水平上尚未发现明确的变化。另外还构建了茶树表达型cDNA文库。