HBV上调Foxp3表达促进肝癌细胞恶性增殖和免疫逃逸的分子机制研究

转录因子Foxp3是Treg的特异标记，与HBV相关肝病关系密切，有望成为肝癌（HCC）治疗的新靶点。然而，新近发现Foxp3可以在多种肿瘤细胞表达，并发挥截然不同的作用，因此研究Foxp3在不同肿瘤细胞中的作用极为必要和迫切。Foxp3在肝癌细胞中的作用迄今尚未阐明，严重限制了其作为肝癌治疗靶点的研究。申请者前期发现，肝癌细胞表达Foxp3，且HBV可上调Foxp3表达；Foxp3过表达显著促进肝癌细胞体外生长增殖，并增强肝癌细胞对CD4+T增殖的抑制作用。据此，本研究提出假说：HBV通过激活肝癌细胞中Foxp3表达，促进细胞恶性增殖及免疫逃逸，参与HCC发生。本课题拟在细胞、动物及临床标本中利用ChIP、siRNA等多种方法研究HBV调控Foxp3基因转录及甲基化机制，确定介导Foxp3调控肝癌细胞增殖及免疫逃逸的关键分子，阐明Foxp3参与HCC发生的作用机制，为HCC治疗提供新靶点

转录因子Foxp3是Treg细胞的特异性标记及重要调节分子，与慢乙肝及肝癌的发生发展关系密切。新近研究发现，Foxp3可以在多种非淋巴来源的肿瘤细胞表达，并发挥截然不同的作用。本课题利用RT-PCR、western blot及免疫荧光和免疫组化技术首次证实肝癌细胞系及肝癌组织内肿瘤细胞表达Foxp3，且肝癌细胞Foxp3表达主要集中在胞浆，而胞浆表达的Foxp3与HBV显著负相关，提示HBV调控肝癌细胞Foxp3表达。体外过表达及siRNA knockdown实验结果显示，HBV及其编码病毒蛋白HBx、preS2可以显著促进不同肝癌细胞系Foxp3表达；启动子及双荧光报告基因分析结果证实，HBx与preS2均可以在转录水平调控Foxp3表达，HBx、preS2对Foxp3启动子的反式激活作用呈现剂量依赖性，并依赖于Foxp3启动子区-465~-445bp间的AP-1结合位点，进一步的EMSA实验证实，HBx可以与该AP-1位点结合。与此相对应，si-RNA抑制肝癌细胞HepG2中c-JUN表达后显著削弱了HBx介导的Foxp3表达，提示c-JUN/ AP-1途径在HBx介导的FOXP3反式激活中发挥重要作用。体内外实验结果显示，Foxp3显著促进肝癌细胞增殖，干扰Foxp3表达明显抑制HBx介导的肝癌细胞系增殖，提示Foxp3是HBx促肝癌发生的重要机制。本研究首次报道了HBx调控Foxp3转录表达进而促进肝癌细胞生长的新机制，为揭示肿瘤细胞表达Foxp3机制提供了新的实验数据。部分研究结果发表标注SCI论文3篇，尚有1篇文章整理待投稿。