基于核受体FXR调控CYP7A1/CYP8B1、BSEP/NTCP参与胆石形成及大黄灵仙胶囊干预机制研究

Cholelithiasis pathogenesis is a research focus of cholangiopathy while postoperative calculus remaining and recurring being a major clinical problem.In recent years,researchers in China and overseas have studied from metabonomics,proteomics and genomics to explore the causes and pathogenesis of cholelithiasis. Our research group found that Dahuanglingxian capsule was effective on cholelithiasis prevention and treatment.We analyzed the experimental analysis of serum and tissue cells of cholelithiasisi model animals and found the correlation between serum metabolite and cholelithiasis. It is really difficult to reveal the pathogenesis of cholelithiasis and the targeting sites of Chinese medicine by researches only from one direction as the forming of gall-stone and acting process of complex prescription of Chinese herbs are both extremely complicated.This research program will apply western blot,RT-PCR,confocal laser scanning microscopy,1HNMR,immunohistochemistry,western blot,RT-PCR,electronic speculum,GC-MS to analyze the protein expression changes of FXR and the bile metabonomic characteristics of cholelithiasisi model.Observe the intervention effects of Dahuanglingxian capsule.We will analyze the metabolizing information and biological events,and reveal the reasoan of forming of cholelithiasis and the mechanism of Dahuanglingxian capsule for prevention and treatment of cholelithiasis.We plan to provide a theory basis and research method for the application of combining Chinese medicine and western medicine for cholelithiasis prevention and treatment.

胆结石形成机制是胆道疾病的研究热点，而胆石病术后结石的残留与复发是临床医疗的难点。近年来国内外学者已从代谢组学、蛋白组学、基因组学等多角度、多方面对胆石成因及其机制进行探讨。课题组前期研究表明，大黄灵仙胶囊能有效防治胆结石。通过对胆石病模型动物血清、组织细胞等进行实验分析，发现多种基因表达通过调控血清代谢产物与胆结石形成的相关性。然而，胆结石的形成及中药复方的作用过程非常复杂，单一角度研究很难真正把握其形成机制以及作用靶点。本项目采用Western-Blot、RT-PCR、激光共聚焦、电镜、气相色谱-质谱联用技术等方法，分析兔胆石病模型核受体FXR系统蛋白表达以及胆汁代谢组学特征的改变，并在此基础上观察大黄灵仙胶囊的干预作用，通过综合分析代谢信息与生物学事件，进一步揭示胆结石形成和大黄灵仙胶囊防治胆结石的机制，为胆石病的中西医结合综合防治提供理论基础和研究思路。

胆石病是临床常见病、多发病，且我国发病率逐年升高。胆结石的形成是遗传、环境、饮食等多种因素综合作用的结果，其形成都经历三个阶段，即：“致石性胆汁”的生成、结晶析出、沉淀形成结石。而致石性胆汁的生成是胆石病形成的关键，主要由于致石性胆汁在促成核因子，尤其是核受体的作用下能加速胆道梗阻，加快胆汁在淤滞环境下析出结晶，最终形成结石。.课题拟通过FXR-CYP7A1/CYP8B1与FXR-BSEP/NTCP受体系统传导机制，采用Western-Blot、RT-PCR、气相色谱-质谱联用技术等方法，探讨核受体FXR对病理性胆汁成分改变及在胆汁酸盐转运机制中的协同作用，并观察大黄灵仙胶囊对上述过程的作用。以“胆病从肝论治”理论为指导，全面的了解大黄灵仙胶囊防治胆结石的作用靶点。.研究结果: ①大黄灵仙胶囊具有防治结石形成作用；②大黄灵仙胶囊可以激活FXR-CYP7A1/CYP8B1、FXR-BSEP/NTCP受体系统，促进mRNA转录及蛋白表达提高，减少肝细胞分泌“致石性胆汁”，从而预防胆结石形成；③大黄灵仙胶囊干预NF-κB信号通路，抑制肝内炎症反应，促进胆囊收缩率，降低胆囊壁厚度，可作为保胆取石术后结石复发预防的参考用药。④肝内胆管结石临床研究发现：大黄灵仙胶囊治疗前后患者胆汁代谢物有统计学差异(p<0.001)，改善胆汁成分，抑制结石形成。.课题组以此取得学术研究成果如下：已发表论文13篇，其中北大核心期刊收录1篇、CSCD期刊收录1篇、国内期刊4篇、SCI论文1篇，培养的硕士研究生发表硕士学位论文5篇、博士学位论文1篇。获得授权专利项目2项，获广西科学技术进步奖二等奖1项。为学科发展培养了9名中青年人才，其中包括5名硕士研究生，1名在读硕士研究生，1名博士研究生，1名博士后；培养相关学科中青年专业人才2名。.科学意义：大黄灵仙胶囊可激活核受体FXR，抑制致石性胆汁形成，上调FXR-CYP7A1/CYP8B1与FXR-BSEP/NTCP受体系统防治胆结石，进一步巩固了“胆病从肝论治”理论，开拓了胆石症防治思路，提供了新靶点参考依据。