适配体-光敏剂轭合物靶向治疗宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的实验研究

在不同宫颈癌细胞系、宫颈上皮内瘤变（CIN）裸鼠及宫颈癌荷瘤裸鼠单纯光动力学治疗的基础上，使用化学方法将光敏剂TMPyP4与靶向抗癌药物AS1411适配体（AS1411 aptamer）共价连接，构建apt-TMP轭合物，作用于不同的宫颈癌细胞系，人工诱导的CIN裸鼠及宫颈癌荷瘤裸鼠体内，研究其作用机制，探索给药方式、途径及剂量，使药物剂量、给药和照光间隔及照光剂量三者之间取得最佳协调，比较治疗效果，比较轭合物在靶组织与非靶组织之间的含量，从而阐明应用apt-TMP轭合物治疗可以减少药物剂量，提高光敏剂的靶向性和杀瘤活性。本项目提出的治疗模式不仅将发挥光动力学治疗与靶向抗癌药物治疗的协同效应，提高治疗肿瘤的疗效，而且有望为有生育要求的CIN和极早期宫颈癌患者，以及其他不能耐受手术及放疗的宫颈癌患者提供一种新的治疗手段。

（1）不同人宫颈癌细胞系光动力学治疗研究：研究了5-氨基乙酰丙酸结合光动力疗法(5-ALA-PDT)对人宫颈腺癌Hela细胞株和鳞癌Siha细胞株凋亡的影响及其相关机制；进行了小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞光动力学治疗敏感性的研究；进行了不同化疗药物联合光动力疗法对人宫颈癌Hela细胞杀伤作用的研究；进行了四甲基吡啶卟啉光动力治疗（TMPyP4-PDT）人宫颈癌细胞hela及Caski的研究并探讨其作用机理；进行了5-氨基乙酰丙酸光动力治疗(5-ALA-PDT)和人端粒酶催化亚单位mRNA的反义寡核苷酸(hTERT-ASODN)联合应用对宫颈癌Caski细胞杀伤作用及其机制的研究；进行了5-ALA-PDT 与siRNA联合应用对宫颈癌细胞杀伤作用及其机制的研究。结论：5-ALA-PDT在体外对人宫颈癌Hela和Siha细胞株有明显的增殖抑制作用，其机理可能与抑制Her-2/neu、HO-1基因表达有关；不同的化疗药物与PDT联合应用均强于单纯PDT的杀伤作用，小剂量顺铂可增加PDT的敏感性；TMPyP4-PDT对宫颈癌细胞的杀伤作用与可能与正性调节P16以及负性调节Ki-67、MCM2、CA-Ⅸ、NF-κB、 c-myc 、hTERC mRNA的表达有关；hTERT-ASODN与5-ALA-PDT联合应用可协同增强对宫颈癌细胞的增殖抑制作用；siRNA通过核仁素表达下调可明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭能力，促进细胞凋亡; 新型光动力疗法对SiHa细胞具有良好的体外光动力效应，光动力治疗联合核仁素小干扰具有协同增效作用；新型光动力治疗可抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，其机制可能与上调E-cadherin，下调Ki67和NF-κB水平相关。（2）宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的光动力学治疗研究：进行正常宫颈上皮细胞和宫颈上皮内瘤变（CIN）细胞培养及鉴定；进行了多次低剂量TMPYP4-PDT对裸鼠宫颈癌移植瘤的抑制作用研究。结论：建立了一种新的正常人宫颈上皮细胞原代培养技术，本方法可以从成人宫颈上皮中快速得到大量高纯度的宫颈上皮细胞；建立了一种从小块宫颈瘤变组织快速获取大量较纯化的高级别CIN细胞的简单、实用的方法；多次低剂量TMPyP4-PDT治疗可显著抑制裸鼠宫颈癌移植瘤的生长，并且无明显副反应发生。