热疗联合溶瘤腺病毒治疗宫颈癌实验和机制研究

宫颈癌发病率高，同步放化疗治疗宫颈癌(Ib2以后，FIGO分期)的标准治疗模式疗效仍不尽人意，分期越晚疗效越差，且放疗后直肠和膀胱的远期毒副反应严重，而患者对治疗的毒副反应日益重视。因此，寻求新疗法改进疗效，减少毒副反应，提高生存质量，日趋紧迫。本项目拟在以前热疗治疗宫颈癌的基础上，通过建立人宫颈癌细胞SCID小鼠移植瘤模型和新鲜人宫颈癌组织SCID小鼠移植瘤模型，模拟人体肿瘤微环境，以热疗联合溶瘤腺病毒瘤体内注射治疗宫颈癌，观察两者联合治疗的疗效，用免疫组化、原位杂交等方法检测肿瘤局部微环境中HIF、HSF、HSP，细胞毒性T细胞、调节性T细胞以及Th1/Th2细胞因子等代表性标志物的变化，以探讨其作用机制，为宫颈癌的治疗探寻一种新的辅助治疗方法，并提供理论依据。同时，也想通过本研究为以后进一步研究热疗加溶瘤腺病毒及放、化疗治疗宫颈癌打下基础，为提高疗效、减少治疗的远期毒副反应探索道路。

本实验针对宫颈癌治疗中存在的问题，探索新的治疗途径，集中于溶瘤病毒与热疗、放疗的结合，在以下方面进行了探索。.1. 不同治疗模式及HPV病毒载量对宫颈癌患者预后的影响，观察了接受治疗患者15年生存情况，并原位半定量分析肿瘤组织HPV病毒载量以及不同治疗模式的临床效果，观察分析发现，联合放化热疗虽对宫颈癌患者预后有明显的影响（单纯放疗，放疗+化疗，放疗+热疗，放疗+化疗+热疗 15年生存率分别为 39.29%, 58.62%, 50.00%, 55.17%, P=0.545)， 但肿瘤细胞HPV病毒载量在确定宫颈癌患者的预后方面权重更大（高、中、低 病毒负载患者15年生存率分别为29.41%，46.67%，62.50%，P=0.026）。 有意义的是独立癌巢高病毒负载更能预示预后不良（rs=-0.368, P=0.001），显示HPV病毒负载在癌细胞的异质性存在可决定宫颈癌患者预后，提示原位精准分析癌细胞病毒负载的临床意义。.2. 动态连续观察不同照射剂量下人体宫颈癌局部免疫潜能细胞亚群的变化，并观察宫颈癌患者局部照射对循环Th1/Th2 细胞因子水平的影响，结果显示，接受局部放射治疗后肿瘤实质、间质中CD8+、Granzyme B+、CD4+ T淋巴细胞亚群均下降，而肿瘤实质、间质中OX40+与FOXP3+ T淋巴细胞接受放射治疗后变化不明显，间质中OX40+ T淋巴细胞在放射治疗3周甚至有所升高，提示Treg细胞比其他T细胞亚群更有放射抵抗性。 宫颈癌患者循环调节性T细胞在接受局部放射治疗初期未显明显变化，5周时呈显著上升趋势，6周时表现最为明显。随后恢复治疗前水平。接受局部照射治疗期间Treg相关细胞因子IL2和TGF β在照射过程中未见下降。免疫相关细胞因子和循环Treg变化趋势与肿瘤局部免疫潜能细胞的变化趋势一致，提示局部放疗对整体体液免疫和细胞免疫反应有抑制作用。可能是通过作用于调节性T细胞实现的。.3. 不同HPV型别和病毒负载宫颈癌细胞热敏感性不同，HPV16阳性宫颈癌细胞株热敏感性低，高病毒负载者更低（CasKi 低于SiHa HPV阳性细胞株），HPV18 次之 (Hela HPV18阳性细胞株），HPV阴性细胞株（C33A）最低。癌细胞热敏感性的机制研究仍在进行中。.4. 通过建立人宫颈癌CaSki细胞(HPV16) 人源化SCID小鼠移植瘤模