检测血清糖原磷酸化酶浓度水平的小分子探针的设计与合成

糖原磷酸化酶(GP)是急性冠脉综合征(ACSS)早期诊断的特异性生化标志物，能够快速灵敏的反映缺血性心肌损伤。因此，血清中GP浓度测定在临床急性冠脉综合征早期诊断、指导治疗及预后观察等方面有着广阔的应用前景。.本项目综合应用活性导向蛋白质谱技术(ABPP技术)，针对糖原磷酸化酶，以吡啶二羧酸类GP抑制剂为基本母核，通过构效关系分析，结合分子对接技术及合理药物设计原理，设计合成特异性作用于GP的小分子探针，并通过酶抑制活性筛选及细胞和血清水平的生物学评价对设计合成的分子探针进行标记检测。本项目的实施将有望建立一种可供临床应用的新型血清GP浓度水平检测方法，开发一类可用于急性冠状动脉综合征早期诊断的重要工具探针。这将有效扩宽化学小分子探针的应用领域，对重要疾病的诊断及机制研究提供重要参考。

糖原磷酸化酶(GP)是急性冠脉综合征(ACSS)早期诊断的特异性生化标志物，能够快速灵敏的反映缺血性心肌损伤。因此，GP测定在临床急性冠脉综合征早期诊断、指导治疗及预后观察等方面有着广阔的应用前景。本项目综合应用活性导向蛋白质谱技术(ABPP策略)，针对GP，分别以BAY R3401和CP320626为活性化合物，设计合成了5类全新的用于标记GP的小分子探针，同时合成了一类探针分子阴性对照，共获得中间体45个，目标化合物24个，其中新化合物62个。测定了所合成探针分子对糖原磷酸化酶的抑制活性，对大鼠原代肝细胞及HepG2人源肝细胞糖原降解的直接抑制作用、对正常的HepG2细胞及胰岛素抵抗的HepG2细胞(IR-HepG2)葡萄糖消耗的影响。通过体外筛选，优选了体外活性相对较好的探针分子分别进行了HepG2细胞结合蛋白标记检测及血清中GP的标记检测，最终获得了一个可在急性冠脉综合征发生时特异性标记血清GP并实现半定量的分子探针V1，该探针分子对急性心肌缺血模型大鼠血清GP的标记明显高于正常SD大鼠血清。经过对所标记的GP进行半定量计算，可以初步判断动物是否发生了急性心肌缺血损伤。通过本项目的实施，建立了一种可供临床应用的新型血清GP浓度水平的检测方法，得到了一个可用于急性冠脉综合征早期诊断的重要工具探针，并为以后设计标记血清GP浓度水平的小分子探针提供更多的理论依据，为急性冠脉综合症的诊断及机制研究提供重要参考。