新型布尼亚样病毒（SFTSV-Like）结构蛋白（SP/GP）线性抗原表位及其自然疫源性研究

Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunya virus-like (SFTSV-like) is firstly discovered in Xinjiang area.The new tick borne pathogen has closely genetic relationship with bunyavirus which cause a major public health concern in China. In this research, the linear B cell epitopes of SFTSV-like (XJ- Guertu strain) nucleocapsid protein (NP) and glycoprotein GP (Gn and Gc) will be scaned by using modified method of biosynthesis. The fine linear B cell epitope maps of SFTSV-like NP and GP (Gn and Gc) will be sketched and the multi peptide serological detection method with high specificity and sensitivity will be established. Combined with the results of specific molecular detection technology, the natural media and host epidemiology investigation will be carried out for revealing the natural attribute of the virus. The results of these studies could provide technical support for effectively monitoring and responding to the emergent and newly occurred bunyavirus diseases in Xinjiang, and lay a substantial foundation for profound understanding of bunyavirus evolution, pathogenicity, host defense and dissemination mechanism.

新型布尼亚样病毒（SFTSV-Like）是在新疆地区首次发现的，与在我国引起重大公共卫生关注的新发蜱传疾病病原体具有密切遗传关系的新布尼亚病毒。本课题将采用改良生物合成肽法，对SFTSV-Like（XJ-Guertu）株核蛋白（NP）和糖蛋白GP（Gc、Gn）进行抗原表位扫描作图定位，绘制SFTSV-Like核蛋白（NP）和糖蛋白（Gc、Gn）精细线性B细胞表位组图谱，建立基于高特异性、高灵敏度的重组多表位肽血清学检测方法，结合特异性分子检测技术，开展自然媒介、宿主流行病学调查，揭示该病毒的自然属性，为有效监控和应对突发和新发布尼亚病毒性疾病提供技术支撑，亦是为深刻认识布尼亚病毒进化演变、致病与宿主防御以及播散机制等奠定坚实基础。

新型布尼亚样病毒（SFTSV-Like）是本课题组首次从草原革蜱中分离获得，系统进化分析表明该病毒与SFTSV和HRTV进化关系密切，命名为古尔图病毒（Guertu virus，GTV）。主要研究结果包括：(1) GTV发现和鉴定：将草原革蜱转染Vero细胞，获得GTV病毒1株，可致小鼠病变，并从人血清中检测出对GTV有中和活性的抗体。（2）GTV核蛋白（NP）和糖蛋白（GP）表位鉴定：共计发现NP 6个、Gn 9个和Gc 13个最小B细胞线性抗原表位基序（BCEs），BCEs均可与阳性羊血清发生反应，且位于抗体易结合区域。（3）GTV嵌合多表位基因原核表达及间接ELISA方法建立：选取6个抗原性较强的MEPX2构建原核表达质粒pET-28a(+)-GTV-MEPX2，获得重组r-GTV-MEPX2蛋白，该蛋白可分别被His-tag鼠单抗、抗NP、Gn和Gc兔多克隆抗血清以及抗GTV阳性羊血清识别。以r-GTV-MEPX2为抗原建立的间接ELISA方法与IFA结果比较表明，本研究建立的ELISA检测方法的准确性较高。（4）多表位肽基因和蛋白诱导小鼠免疫应答效果：pVAX-MEPX2联合rMEPX2组可诱导小鼠产生最高水平细胞免疫应答和体液免疫应答，并产生最高水平的抗体，促进CD4+和CD8+T细胞亚群的活化和免疫效应。（5）GTV在自然宿主和媒介中的分布：乌苏和昌吉地区的草原革蜱和亚洲璃眼蜱的SFTSV阳性率均较GTV高，长尾黄鼠则是GTV阳性率远高于SFTSV，而大沙鼠携带2个病毒的阳性率差异不大。基于GTV-rNP为抗原，对乌苏地区的羊和长尾黄鼠血清GTV IgG 抗体检测，阳性率分别为40.17%和14.8%。在本项目资助期间，共发表论文7篇，其中SCI论文6篇，中文核心论文（三区）1篇，申请专利2项，培养博士研究生1名，硕士研究生7名。