汉滩病毒结构蛋白抗原表位的系统鉴定及其应用研究

CD8+T细胞(CTL)和CD4+T细胞在抗病毒免疫中均起着重要作用。但目前对引起肾综合征出血热(HFRS)的汉滩病毒(HTNV)特异性T细胞免疫应答的研究仅限于数个核蛋白（NP）特异性CTL表位。我们前期发现23个新的HTNV-NP T细胞表位，其细胞免疫应答与免疫保护有关。本项目拟采用覆盖HTNV-NP和糖蛋白（G1、G2）全长的部分重叠肽和ELISPOT技术，系统鉴定出NP、G1和G2上的CD4+和CD8+T细胞表位。并挑选其中的免疫优势表位，用胞内细胞因子染色、流式细胞术和四聚体等技术，搞清HFRS患者中表位特异的T细胞频率、增殖、杀伤和分泌细胞因子的变化及其与病情、病程的相互关系。同时鉴定HTNV结构蛋白上的B细胞表位，尤其是免疫优势表位及中和抗体表位。深入阐明HTNV感染后适应性免疫应答产生的规律及其与免疫保护或免疫损伤的关系，并为新型HTNV疫苗的设计提供重要的理论依据。

本课题在前期研究结果基础之上，鉴定出5个HLA-I类分子限制的HTNV-NP CTL表位，发现HLA-A2和-B35限制的HTNV-NP表位特异性CTL应答频率在急性期轻型/中型患者中明显高于重型/危重型患者。表位特异性CTL的增殖能力以及分泌IFN-γ水平与HFRS疾病病情呈负相关，提示其参与抗病毒作用；X射线晶体衍射显示HLA-B3501/VY-9和HLA-A0201/FA-9整体结构是典型的MHC构象。系统鉴定出HTNV-Gn/Gc上T细胞表位，探讨了Gn/Gc特异性CD4+ T细胞应答的抗病毒作用及其机制；初步筛选出一组HLA-A2限制的HTNV-Gn/Gc上CTL 9肽表位，为阐明HTNV感染后细胞免疫应答产生的规律及其免疫保护作用的机制，并为新型HTNV基因和多肽疫苗的设计提供重要的理论依据。鉴定出3D8鼠源性中和活性单抗识别HTNV-Gn/Gc的表位肽氨基酸序列并筛选出其中的关键氨基酸，为阐明具有治疗作用的3D8单抗的作用机制提供了重要依据。建立了一步法检测HFRS患者血清HTNV RNA病毒载量方法，发现HFRS患者血浆标本中HTNV RNA载量随病程逐渐下降，并且患者血浆中HTNV病毒载量与病情和病程相关。拓展了重要免疫分子与HFRS发病的关系的研究，发现HFRS患者血清高水平CXCL10与病情相关，HFRS患者CD100表达变化水平与疾病明显相关，为下一步深入研究HTNV感染的HFRS发病机制以及免疫应答规律提供了基础。