脾气虚证大鼠肠神经-ICC-平滑肌网络信号转导通路损伤和补益方香砂六君子汤修复机制

脾气虚是最常见的虚证之一，也是脾脏其它证候的基础。临床观察结果显示脾气虚证患者存在明显胃肠运动功能障碍，补益方剂香砂六君子汤可纠正胃肠运动功能障碍，有效治疗脾气虚证，但详细机理还不清楚。最近研究证明肠神经-Cajal间质细胞（ICC）-平滑肌网络信号转导通路与胃肠运动密切相关。本研究应用免疫荧光组化双重或多重染色标记、共聚焦显微镜观测、免疫电镜超微结构检测、TUNEL、BrdU和原位杂交等方法；在胃肠运动神经形态、ICC和平滑肌细胞功能和形态、肠神经-ICC间递质受体/信号转导和ICC-平滑肌细胞间缝隙连接等多个层面；在组织、细胞和基因水平，从形态、功能和细胞间通讯的角度，观察脾气虚证大鼠肠神经-ICC-平滑肌网络递质受体/信号转导通路变化和补益方-香砂六君子汤干预机制。探讨脾气虚证病理生理改变的本质，丰富脾胃学说科学内涵，为补益方剂和香砂六君子汤进一步开发和推广、应用奠定理论基础。

临床观察结果显示补益方剂香砂六君子汤可纠正胃肠运动功能障碍，有效治疗脾气虚证，但详细机理还不清楚。最近研究证明肠神经-Cajal间质细胞（ICC）-平滑肌网络信号转导通路与胃肠运动密切相关。本研究应用免疫荧光组化多重染色标记、共聚焦显微镜观测、免疫电镜超微结构检测交等方法；在胃肠运动神经形态、ICC和平滑肌细胞形态、肠神经-ICC间信号转导和ICC-平滑肌细胞间缝隙连接等多个层面；从形态和细胞间通讯的角度，观察了脾气虚证大鼠肠神经-ICC-平滑肌网络信号转导通路变化和补益方-香砂六君子汤干预机制。.研究结果显示：①脾气虚证大鼠胃肠粘膜充血、水肿，回盲部极度扩张，粪便潴留，结肠明显增粗；香砂六君子汤能够显著改善梗阻征，恢复胃肠正常形态；②脾气虚证时，肠神经系统受到明显损害，肠运动神经纤维Ach/SP/VIP/SP数量减少，网络样结构受到破坏；香砂六君子汤可以减轻脾气虚证状态下胃肠运动神经的损伤，保持胃肠肠神经网络样结构的完整性；③脾气虚证状态下，ICC-DMP数量明显减少，网络结构受到严重破坏，ICC-DMP周围表达PKA/PKC蛋白明显减少，肠神经—ICC-DMP之间信号转导通路受损；香砂六君子汤能够减轻脾气虚证状态下ICC-DMP自身损伤及其网络结构损伤，还能修复肠神经—ICC-DMP之间的信号转导通路损伤；④脾气虚证大鼠胃肠肌层中的连接蛋白43表达和分布减少；香砂六君子汤可减少脾气虚证状态下连接蛋白43的破坏；⑤脾气虚证时胃肠道ENS-ICC-SMC网络结构中缝隙连接数量减少，结构破坏；香砂六君子汤可以通过维持缝隙连接数量，保护缝隙连接的结构，从而保持胃肠道肠神经-ICC-平滑肌网络信号转导功能。.本研究结果提示：脾气虚证时肠神经-ICC-平滑肌网络信号转导通路受到严重损伤。补益方剂和香砂六君子汤可通过修复肠神经-ICC-平滑肌网络损伤，有效治疗脾气虚证。本研究率先以与胃肠运动密切相关的肠神经-ICC-平滑肌网络为对象，从形态和细胞间通讯的角度，观察了脾气虚证大鼠肠神经-ICC-平滑肌网络信号转导通路变化和补益方-香砂六君子汤干预机制。初步探讨了脾气虚证病理生理改变的本质，丰富脾胃学说科学内涵，为补益方剂和香砂六君子汤进一步开发和推广、应用奠定理论基础。本课题培养了2名中西医结合硕士， 3人次参加了第四届世界中西医结合大会进行学术交流。