食源性病毒的微流控芯片快速检测研究

本项目针对我国目前食品安全的严峻形势，以食源性疾病的可预防性为出发点，将研究重心放在食源性疾病病原的检测技术上。选用国内食源性疾病密切相关的食源性病毒作为研究对象，将快速、高效、灵敏的新型智能化微流控芯片－激光诱导荧光分析手段与分子生物学技术、化学计量学方法（响应曲面法、遗传算法-支持向量回归等）相结合，建立食源性病毒的快速分析方法，并对相关食品进行初步调研，分析和评估各类食品受病毒污染的风险性。拟建立的方法具有快速、灵敏、分析成本低和绿色环保等优点，为预防医学和卫生检验学研究提供新的有力分析手段，对保障食品安全、人民健康和社会和谐发展具有重要的现实意义。

食源性病毒是严重危害人类健康的重要致病因子，具有发病率高、感染剂量低、抵抗力强、易引起食源性疾病的大规模爆发流行等特点。本项目针对目前我国食品安全的严峻形势和食品中病毒含量较少且不能繁殖以及某些病毒体外培养困难等现状，选用国内食源性疾病密切相关的诺如病毒（Norovirus）、轮状（Rotavirus）、星状病毒（Astroviruses）、腺病毒（Adenovirus）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16）等食源性病毒作为研究对象，将快速、高效、灵敏的微流控芯片-激光诱导荧光检测手段与聚合酶链反应（PCR）、逆转录PCR（RT-PCR）等分子生物学技术及新发展的化学计量学方法相结合，建立了食源性病毒的快速分析方法。本研究对食品样品中病毒的洗脱与浓缩富集前处理方法、病毒核酸的逆转录及多重PCR/RT-PCR条件、微流控芯片分离条件等进行了细致的优化，并对已有的微流控芯片-激光诱导荧光检测系统进行了优化，选择灵敏度高且更加安全环保的SYTOX Orange 和SYBR Gold替代灵敏度低、毒性较大的溴乙锭作为核酸染料，使仪器的灵敏度进一步提高；选用电渗流小、对样品吸附少的聚甲基丙烯酸甲酯（Polymethylmethacrylate，PMMA）材质十字型芯片，不需要进行表面涂层改性，应用更为方便。将所建立的方法用于葡萄、布朗李、黄瓜、胡萝卜、生菜、菠菜、洋葱和卷心菜等相关食品的初步调研。所建立的方法具有快速、灵敏、分析成本低和绿色环保等优点，为预防医学和卫生检验学研究提供新的有力分析手段，对保障食品安全、人民健康和社会和谐发展具有重要的现实意义。