上调肝细胞核因子1α表达治疗非酒精性脂肪性肝病的实验研究

非酒精性脂肪肝病（ NAFLD）现已成为危害人类健康最常见的肝病。肝细胞核因子（HNF1α）是调控许多肝脏重要功能基因表达的重要转录因子，这些基因的表达产物包括参与糖、脂、蛋白合成、解毒、胆汁排泌的各种酶等，同时HNF1α也与糖脂代谢关系密切。法尼酯X受体（FXR）是最近NAFLD研究的重要潜在靶点，最近研究发现HNF1α可能是FXR的转录激活因子。本课题拟研究HNF1α基因导入对于脂肪酸诱导的肝细胞脂肪性变以及糖脂代谢的影响，并进一步阻断FXR通路观察对于HNF1α作用的影响，对HNF1α治疗NAFLD的机制进行探讨。同时将AdHNF1α尾静脉注射导入高脂饮食非酒精性脂肪肝大鼠模型，检测HNF1α导入后大鼠肝功能、糖脂代谢、肝脏脂肪变性的变化，明确其对于NAFLD的作用。结果如能证实，可望为NAFLD的治疗提供新的手段。

基于HNF1α在糖脂代谢中的潜在重要作用，以及对于FXR可能的调控作用，我们认为上调HNF1α表达可能是NAFLD很有希望的治疗靶点，本研究将HNF1α治疗实验性NAFLD，分别从体外和体内验证HNF1α的疗效。.我们研究发现，NAFLD进程与肝细胞核因子1α和FXR表达关系密切。Real-time PCR显示脂肪肝大鼠肝细胞HNF1α、FXR的表达较正常大鼠肝细胞下降分别为97.1%和96.8%。免疫组化显示正常大鼠肝脏HNF1α、FXR均有大量表达，而高脂饮食大鼠肝脏HNF1α、FXR表达明显下降，并且高脂饮食18周较8周减少更为明显。.AdHNF1α 感染的BRL-3A细胞较AdGFP感染的细胞和模型对照细胞橘红色脂肪颗粒明显减少。根据HNF1α和FXR基因启动子序列可能的结合位点设计引物，染色质免疫共沉淀结果说明HNF1α基因可直接结合于FXR基因启动子序列调控FXR表达。病毒AdHNF1α和AdGFP分别感染BRL-3A肝细胞株，Real-time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学法检测均显示FXR在BRL-3A肝细胞株中的表达明显上调，Western blot显示SHP在BRL-3A肝细胞株中的表达明显上调。.体内研究显示AdHNF1α干预组治疗期增重、肝重和肝指数较AdGFP干预组和模型组显著降低，肝功能和血脂明显改善，肝脏脂质含量明显降低。HE染色和苏丹Ⅲ染色提示AdHNF1α干预组大鼠肝脏脂肪变性明显减轻。 免疫组织化学显示AdHNF1α干预组肝细胞核内可见大量HNF1α、FXR的表达，胞浆内可见大量SHP表达，AdGFP干预组和模型对照组仅见少量表达。免疫组织化学显示AdHNF1α干预组IL-6、TNF-α和TGF-β1仅见微量表达，而AdGFP干预组和模型对照组大量表达。. 本研究可以得出以下结论：1.脂肪肝大鼠肝细胞HNF1α和FXR的表达下调。2. 重组复制缺陷型腺病毒AdHNF1α可高效表达HNF1α，上调HNF1α表达可减轻BRL-3A肝细胞株脂肪变性。3. HNF1α基因可直接结合于FXR基因启动子序列调控FXR表达，上调HNF1α表达可激活FXR表达以及SHP的表达。4. AdHNF1α经尾静脉注射途径治疗NAFLD大鼠模型，可明显减轻脂肪变性。