FXR信号通路在肝细胞核因子1α治疗非酒精性脂肪性肝病中的作用研究

Our previous study has demonstrated that the expressions of hepatocyte nuclear factor 1α (HNF1α) and farnesoid X receptor (FXR) decrease with the process of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). HNF1α could reverse the steatosis of hepatocytes and alleviates NAFLD in rats feed with high fat diet. Besides, HNF1α directly regulates the expression of FXR. Presently, some results above have been used to apply an invention patent (No.201110043321.6). In this study, we will further explore in depth the role of FXR related signal pathway in the therapy of HNF1α on NAFLD. We will screen the siRNAs of HNF1α and FXR in vitro and evaluate the steatosis of hepatocyte and mice’s liver and the expression change of FXR related signal pathway in vivo and in vitro. Furthermore, we will verify whether knock-down or knock-out will weaken the therapeutic effect of HNF1α on NAFLD. This study would further clarify the mechanism of the therapy of HNF1α on NAFLD, and might provide as a new treatment for NAFLD.

在前期研究中发现，在大鼠非酒精性脂肪肝病（NAFLD）进程中肝细胞核因子（HNF1α）HNF1α和法尼酯X受体（FXR）表达均逐渐下降，上调HNF1α表达可逆转BRL-3A肝细胞脂肪变性，并且可显著减轻高脂饮食大鼠肝脏脂肪变性，同时还发现上调HNF1α可激活FXR表达。目前申请人已将部分结果申请发明专利（201110043321.6），在本课题中我们将进一步全面深入探讨FXR相关信号通路在HNF1α治疗NAFLD中的作用。体外筛选HNF1α和FXR的siRNA，体内外观察下调HNF1α后肝细胞和小鼠肝脏脂肪变性情况及FXR相关信号通路变化，并体内外研究下调FXR或FXR基因敲除对于HNF1α治疗NAFLD作用的影响。本研究将将进一步阐明HNF1α治疗NAFLD的机制，可望为NAFLD的治疗提供新的手段。

基于HNF1α在糖脂代谢中的潜在重要作用，以及对于FXR可能的调控作用，我们认为上调HNF1α表达可能是NAFLD很有希望的治疗靶点，在本课题中我们将进一步全面深入探讨FXR相关信号通路在HNF1α治疗NAFLD中的作用。.根据HNF1α和FXR基因启动子序列可能的结合位点设计引物，染色质免疫共沉淀结果说明HNF1α基因可直接结合于FXR基因启动子序列调控FXR表达。病毒AdHNF1α和AdGFP分别感染BRL-3A肝细胞株，Real-time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学法检测均显示FXR在BRL-3A肝细胞株中的表达明显上调，Western blot显示SHP在BRL-3A肝细胞株中的表达明显上调。.用HNF1α慢病毒小干扰感染人Hep G2肝癌细胞株，可显著下调HNF1α表达，7天后被感染细胞油红染色出现明显脂肪变性。免疫组化和Western Blot都显示HNF1α基因敲除小鼠在肝脏和胰腺表达明显降低，在肠道和肾脏表达无明显变化。发现HNF4α、CEBP等肝细胞核因子表达无变化，CAR、FXR、PXR、LXR等核受体表达均明显下调。脂质代谢基因的蛋白表达变化，发现ACC、FAS、LPL表达均明显上调。尾静脉注射adFXR后，HNF1α缺陷小鼠肝脏脂肪变性显著减轻，肝脏FXR和SHP表达明显增加，IL-6、TNF-α和TGF-β1表达明显减少。.本研究可以得出以下结论：⑴HNF1α可直接调控FXR表达；⑵下调HNF1α可诱导肝癌细胞株脂肪变性；⑶ HNF1α基因敲除导致小鼠肝脏脂肪变性，并引起FXR等多种核受体相关信号通路以及脂质代谢基因表达变化；⑷上调FXR基因可减轻HNF1α缺陷小鼠肝脏脂肪变性。