益气活血法对大鼠萎缩性胃炎Hedgehog信号通路的调控机制研究

Recent studies (30572388、30973741) by the National Natural Science Foundation discovered that: Astragalus and pseudo-ginseng on behalf of invigorating Qi and activating blood therapy could protect gastric mucosa by increasing the expression of Heat Shock Protein70(HSP70) through inducing the expression of transcription factor GAF. We use universally acknowledged rat models to study the molecular mechanism of Hedgehog signal pathway on atrophic gastritis by invigorating Qi and activating blood therapy. We take a lead research on molecular mechanism of Hedgehog signal pathway in rats with atrophic gastritis by using liquid chip firstly in the area of atrophic gastritis by Traditional Chinese Medicine (TCM), and make a detail research on the expression of Shh、Smo、Fu、Ptch、SuFu、Gli1/2/3 in Hedgehog signal pathway, which would confirm the acting targets of atrophic gastritis by invigorating Qi and activating blood, uncovering the mechanism of Hedgehog signal pathway on rats with atrophic gastritis. Meanwhile, the difference in regulating Hedgehog signal pathway would be explicated by comparing the their differences between Astragalus, pseudo-ginseng and Purmorphamine, making a great contribution to clinical using of invigorating Qi and activating blood eventually.

在国家自然科学基金（30572388、30973741）课题研究中发现：黄芪、三七为代表的益气活血法可以通过诱导转录因子GAF的表达，促进热休克蛋白70（HSP70）表达上调而发挥胃黏膜保护作用。采用目前较为公认的方法建立萎缩性胃炎大鼠模型，研究益气活血法对大鼠萎缩性胃炎Hedgehog信号通路调控的分子机制。率先进行萎缩性胃炎Hedgehog信号通路调控机制的研究，首次将液相芯片技术引入中医药防治萎缩性胃炎的研究领域，重点研究Hedgehog信号通路中Shh、Smo、Fu、Ptch、SuFu、Gli1/2/3的表达，明确益气活血法治疗萎缩性胃炎的作用靶点，揭示益气活血法对大鼠萎缩性胃炎Hedgehog信号通路调控的机制，同时比较益气活血法代表药物与阳性对照药Purmorphamine治疗萎缩性胃炎的疗效，明确二者在调控Hedgehog信号通路的作用差异，为益气活血法的临床应用提供科学依据

慢性萎缩性胃炎在我国发病率逐渐低龄化，成为目前公认的难治性疾病之一，并且属于胃癌的前期疾病，如果不加以控制，将会发展为胃癌。西医治疗CAG并没有明确的特效药，常为对症治疗缓解症状。中医药治疗CAG疗效较好，因此开展中医药对CAG的防治具有重要的临床意义。本研究拟通过黄芪、三七对大鼠萎缩性胃炎Hedgehog信号通路调控的影响，明确益气活血法治疗CAG的效果及主要单体成分干预的分子机制，为临床应用提供科学依据。.本研究采用幽门弹簧置入术配合高盐热糊灌胃法及MNNG负荷多因素法建立萎缩性胃炎大鼠模型，HE染色定性、定量分析萎缩、炎症水平，TUNEL法原位检测凋亡细胞，免疫组化法检测PCNA表达，液相芯片技术检测fas/fasL、EGF及TGF，以综合评价胃黏膜细胞的增殖与凋亡水平。运用免疫杂交、免疫组织化学荧光、量子点介导的激光扫描共聚焦显微镜等先进技术和手段，定性、定量、定位分析益气活血法代表药物对萎缩性胃炎Hedgehog信号通路中相关基因mRNA及其蛋白表达的影响。.通过研究我们发现幽门弹簧植入术诱导的CAG模型更符合萎缩性胃炎的病理变化，MNNG诱导的CAG大鼠模型更趋向于萎缩性胃炎癌前病变的病理变化。黄芪、三七作为益气活血法的代表药物，可以明显改善萎缩性胃炎大鼠胃黏膜的萎缩和炎症状态，其中，黄芪三七合用对凋亡作用明显，黄芪单用对细胞增殖抑制作用显著。.Hedgehog信号通路表达方面，两组模型均抑制了hedgehog信号通路，其中MNNG模型的抑制作用更强，考虑这与其病理变化多为肠上皮化生及异型增生有关。两组模型中激动剂Purmorphamine均可明显改善因子表达，激活hedgehog信号通路。幽门弹簧植入术诱导的CAG模型中，黄芪组在改善黏膜萎缩及激活hedgehog通路方面疗效显著，而MNNG诱导的CAG模型中，三七组及黄芪三七组疗效更佳。Purmorphamine作为hedgehog的激动剂，它的作用环节为Smo，对于通路上游因子Shh、Ptch并没有明确干预作用。而黄芪、三七及其配伍组不仅对于hedgehog信号通路上Smo及其下游因子有效，对上游因子Shh及Ptch均具有明显升高作用。弥补了Purmorphamine只能靶向Smo的局限性。