益气活血法调控动脉粥样硬化大鼠Rho激酶信号通路的分子机制

Atherosclerosis（AS）is the common pathological basis of cardiovascular and cerebrovascular diseases and type II diabetes. During the formation of atherosclerosis, the endothelial cells (EC) damage is the initiating factor of AS,proliferation and migration of vascular smooth muscle cells play an important role in the AS. Rho kinase signaling pathway activated through different channels, leads to increased EC permeability, promotes vascular smooth muscle cell proliferation and migration, promotes upregulation of multiple cytokines, related of inflammation, oxidative stress, thrombosis and fibrosis ,and involves in cell adhesion, migration and gene expression, so promotes the formation of AS.The preliminary experimental study made by the group found, representative formulae of Qi-Benifiting and Blood-Activating Chinese medicinal herbs Bu Yang Huan Wu Tang can downregulate the expression of vascular cell adhesion molecule 1 mRNA and MMP-9 expression, reduce CRP and lipid levels,play an anti-atherosclerotic role, but the molecular mechanism needs to be further proven. The project according to the latest report of atherosclerosis, will make use of AS rat model line as a whole animal experiments to be induced by high fat diet and the method of smooth muscle cells cultured by mouse serum containing drug,and we will study the influence of Bu Yang Huan Wu Tang on atherosclerosis model Rhokinase signaling pathway ,in order to reveal new targets and new ways of the anti-atherosclerotic role of the formulae, elucidate the molecular mechanism of regulation of Rho kinase signaling pathway,which has important theoretical significance and practical value of guiding the clinical use of the Qi-Benifiting and Blood-Activating Chinese medicinal herbs to prevent and treat atherosclerosis effectively.

动脉粥样硬化（AS）是心脑血管疾病、2型糖尿病共同的病理基础。动脉粥样硬化形成过程中，内皮细胞（EC）受损是AS发生的始动因素，血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移在AS中起到重要的作用。Rho激酶信号通路通过不同途径活化后，导致EC通透性增加，促进VSMC增殖和迁移，促进与炎症、氧化应激、血栓形成和纤维化有关的多种细胞因子的上调，并参与了细胞的黏附、迁移及基因表达等，从而促进AS的形成。本课题组前期实验研究发现，中医益气活血法的代表方剂补阳还五汤可以下调血管细胞黏附分子mRNA(VCAM-1mRNA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达，降低C反应蛋白(CRP)和血脂水平，具有抗动脉粥样硬化作用，但该方药作用的分子机制有待进一步探明。本项目根据AS研究的最新报道，拟用高脂饲料诱导的AS大鼠模型行整体动物实验和平滑肌细胞含药鼠血清培养法，观察补阳还五汤对AS模型Rho激酶信号通路的影响，以揭示该方药抗动脉粥样硬化作用的新靶点和新途径，阐明其调控Rho激酶信号通路的分子机制，对指导临床运用益气活血法有效防治动脉粥样硬化有重要的理论意义和实用价值。

背景:本项目采用用高脂饲料诱导的AS大鼠模型行整体动物实验和VSMC含药鼠血清培养法，观察补阳还五汤（BYHWD）对AS模型Rho激酶信号通路的影响，以揭示该方药抗AS作用的新靶点和新途径。.研究内容: 从整体组织器官水平观察BYHWD对AS大鼠模型血管形态学、主动脉超微结构、脂代谢、IL-6、IL-8和CRP、Rho激酶信号通路及相关细胞因子表达的影响；从离体细胞分子水平观察BYHWD含药鼠血清是否主要通过Rho激酶介导的信号通路影响VSMC的增殖而发挥抗AS作用。.结果: 1. BYHWD可以改善AS模型大鼠主动脉的病理形态，改善 VEC 及VSMC超微结构，改善AS模型血脂水平，降低IL-6、IL-8和CRP、Rho激酶信号通路及相关细胞因子表达，具有抗AS作用。2. BYHWD含药血清可以通过Rho激酶信号通路及相关细胞因子影响和抑制VSMC的迁移和增殖，从而抑制AS病变的形成和进展。.关键数据: 1.与正常组比较，模型组血脂水平、IL-6、IL-8、CRP、主动脉ROCK、NF-κB p65、TF、VCAM-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9、PAl-1mRNA表达量水平升高，eNOSmRNA表达量水平降低，主动脉p-MYPTl、p-MLCP、p-MLC、ROCK1、ROCK2蛋白的表达升高，有统计学差异（P<0.05）。与模型组比较，BYHWD高剂量组、辛伐他汀对照组、BYHWD预防组上述指标明显降低，有显著的统计学差异（P<0.01）。2.与正常对照组相比，各组模型对照组含药血清作用后血管平滑肌细胞OD值明显升高（P<0.01）；NF-κBp65亚单位、ROCK1、TF、VCAM-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9的mRNA 的表达升高（P<0.05）；p-MYPTl、p-MLC、NF-κB p65、ROCK1蛋白的表达升高（P<0.05），有统计学差异。与模型对照组相比，各组BYHWD高剂量治疗组含药血清作用后血管平滑肌细胞OD值降低，相关的细胞因子及上述指标降低，有统计学差异（P<0.05）。.科学意义: 益气活血法的代表方剂补阳还五汤可通过调控Rho激酶信号通路及相关细胞因子的表达，多层次、多途径、多靶点的实现对AS的有效防治，为中医药防治AS提供临床药理佐证，有一定的推广应用前景。